激活筛选技术实验流程

通过在细胞中过表达特定基因的cDNA是基因功能研究的重要方法，但是由于cDNA文库难以覆盖大量大片段的基因，基因大小也会影响转染效率，cDNA文库不能覆盖各种转录本等种种因素限制了全基因组范围的过表达获得性功能筛选。将切割活性突变的dCas9融合转录激活元件，可以通过sgRNA介导实现特定基因的转录激活提高基因的表达量，从而进行获得性功能筛选。由于sgRNA序列较短，因此较容易获得一个能够覆盖全基因组范围的寡聚核酸序列文库，进而建立激活sgRNA文库;利用慢病毒作为载体，可获得每个细胞单个基因激活的细胞文库;再通过药物或者表型筛选获得目的细胞;最后进行高通量测序，可以检测出相应的激活基因。

　　通过对sgRNA结构进行改造，在sgRNA支架序列中插入MS2 RNA结合蛋白序列，再利用MS2融合转录激活元件P65和HSF，可以使得sgRNA介导的dCas9-VP64元件发挥激活作用的同时，通过MS2招募P65和HSF等激活元件，从而大幅提高内源基因的激活效率。

　　技术特点

　　通过慢病毒形式的文库可以提高激活效率;

　　包含70,290条sgRNA，能够覆盖23,430个基因和lncRNA;

　　采用第三代慢病毒包装系统，双病毒方案，有效提高病毒感染效率。

　　适用范围

　　寻找潜在的药物靶点;

　　筛选药物活性、药物敏感性靶标基因;

　　发现潜在的联合用药靶点或者相关信号通路;

　　细胞对致死致病源感染的敏感基因;

　　发现肿瘤细胞增殖关键基因。

　　实验流程

　　载体信息