小鼠基因型鉴定是什么？小鼠基因型鉴定详细操作步骤

小鼠基因型鉴定是指通过一定的生物学检测方法确定小鼠基因型的技术。常用的方法包括PCR，Realtime PCR，HRM以及PCR结合测序等。

操作步骤：

1、样品DNA的提取

（1）剪鼠尾脚趾，1mm

（2）加100ul lysls buffer， 2ul protease K， 55℃消化2h

（3）95℃灭活protease K 5min

（4）快速离心（12000rpm 5min）

注：DNA产物-20℃条件下保存

鼠尾是去动物房拿的，3楼，一个房间-20℃的冰箱里。

加buffer的时候先把鼠尾戳到管子底部，再把buffer打进去，保证鼠尾沉在buffer里面（不要漂浮在上面，更不要还在管壁上）

高温的仪器在窗户边上，铁锅和离心机旁边。

12000rpm的离心机是右边比较小的那台

2、取20ul DNA产物，配置10管20ul PCR反应体系，具体如下：

样品2ul+3种引物（每种各1ul）+ mixture 10ul + 5ulH2O=20ul

primer1：OIMR4182 common

primer2：OIMR4183 WT

primer3：OIMR7297 muT

先用比较大的EP管，加3种引物各10ul，mixture100ul，H2O50ul。这几样东西都是放在冰箱里的管子里的，以后做，还是让学姐拿一下，毕竟我不太认识。

再分别加入10个小的EP管里，再加2ul样品。

3、PCR扩增反应

reaction condition

step       temp/℃  time

1           95            5min

2           94             30s

3           62            35s

4           72            45s

5           72            3min

6           4              Hold