THP-1细胞基因敲除详细介绍

在血液粒细胞的研究中，THP-1是一个非常经典的细胞模型。如何在THP-1细胞株进行基因敲除/基因敲入/基因突变也是各个课题组的一个关心的问题！如何解决THP-1细胞的基因敲除，也是我们的一个重要的研发方向，经过了一年多的研发，我们终于在根本上解决了这个THP-1细胞株的基因编辑的困难，可以为客户提供编辑效率高、结果稳定、周期快速的细胞基因敲除的解决方案。

具体的THP-1细胞基因敲除/基因敲入/基因突变的技术流程如下：

1、THP-1细胞的培养条件的优化和克隆形成的优化；

在原来ATCC推荐的培养基的基础上，我们优化获得的培养基的条件如下 ：RPMI-1640 Medium，2-mercaptoethanol 0.05 mM，fetal bovine serum 10%（专门优化筛选批次），抗氧化添加物。

由于加入了抗氧化的成分，大大提升了THP-1细胞的增殖的速度和克隆形成效率，同时由于对渗透压进行专门的优化，也使得THP-1的细胞的形态更加完美。（下图是接种时与48小时后的对比）

细胞接种的密度

细胞48小时后的图片

2、THP-1细胞优化的电转效率和存活率；

由于THP-1细胞是悬浮培养，所以对很多病毒的转染效率不高，所以电转是理想的选择。依据这个细胞的特性，我们优化了其中的电转的缓冲液，加入了吸附剂，可以大大促进DNA吸附到细胞的表面，同时还加大的缓冲液的电阻，从而可以提供电转的电压，从而大幅度的提升了电转的效率，是传统缓冲系统的3-5倍的效率，达到80%。同时由于提升了细胞的存活率到90%，所以细胞的基因编辑的效率也得到了大幅提升。

GFP荧光电转染后

【GFP表达载体电转后72小时对比图片】

3、THP-1细胞的快速克隆化条件优化；

4、THP-1细胞株快速特性。

市面上多数THP-1细胞质量均比较差，转染效率很低。筛选到优质的THP-1细胞是项目成功的关键因素之一。

基因敲除细胞株的成功案例

5、与市场上其他公司的THP-1技术服务的对比：