稳定细胞株筛选方法及步骤

研究某个基因的功能最常用的手段是在宿主细胞中过量表达或者通过RNA干扰的方法knock-down该基因,常规手段有瞬时转染和筛选稳定细胞系。

筛选出该基因的过表达或者RNA干扰的稳定细胞系会给您的实验带来极大的便利。有了稳定细胞系,后期的Co-IP或者Pull-Down实验会非常便利;稳定表达重组荧光蛋白的细胞系可以让您动态的观察分子在细胞中的运动。 构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418来代替新霉素进行选择性筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

筛选稳定细胞系的方法

1)转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系

2)慢病毒感染筛选稳定细胞系

慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达,因此,慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。

稳定细胞株筛选流程

(0)

相关推荐

  • 质粒瞬转构建稳定细胞系?

    稳定细胞系构建最常用的方法是采用慢病毒.那是否一定要采用慢病毒呢?答案是非必须的.采用质粒瞬转也能够构建稳定细胞系.下面就和细胞君一起熟悉质粒瞬转构建稳定系: 方法应用前题:目的细胞的瞬转效率? 细胞 ...

  • Science | 哺乳动物细胞基因表达的超声成像

    编译:罗睺,编辑:十九.江舜尧. 原创微文,欢迎转发转载. 美国加州帕萨迪纳加州理工学院化学与化学工程系Mikhail G. Shapiro等人于2019年9月27日在Science发表了题目为< ...

  • CHO稳定细胞株筛选方法

    2.1 宿主细胞选择 工业上主要使用两大类CHO 细胞:① GS野生型,含弱的GS活性(GS WT):CHO-K1(ATCC CCL-61,ECACC 85051005),CHOK1SV(lonza) ...

  • 筛选稳定细胞株的方法主要有哪些?

    主要有三类方法: 1)单克隆环法:此类方法多用于整合率低的转染方法或者需要得到单克隆细胞株的实验.其优点在于工作量小,只需将转染或者病毒载体感染后的细胞按照一定的细胞密度转移至新皿中,并使用合适的药物 ...

  • 稳定细胞株筛选药物浓度确定方法

    在使用G418.潮霉素B或嘌呤霉素筛选稳定细胞系细胞之前,需要先通过梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度.对于一些常见的细胞系,通常可以在资料中找到推荐的药物浓度.例如Hela细胞用400 μg/m ...

  • 双色球技巧:蓝球如何筛选方法和步骤推荐

    一个号码,成为冷号,附带产生两个现象,一个是遗漏时间长,二是开出频次低,这两样都不利于中奖,要是长时间不出--无论你选号的水平多高,都中不了奖.而热号则刚好相反,短期内频繁开出,遗漏时间短,如果我们要 ...

  • 稳定株是单克隆的判别筛选方法

    实验室里大家都埋头做实验,可为什么老板每次都骂我们,你都快30的人了这也不会那也不会,白长这么大了,栽培了你那么多年到头来啥也指望不上.对此,我深感委屈,那个细胞我养了那么久,它还是那样衣来伸手饭来张 ...

  • 汤面(牛肉面)制作的方法和步骤

    牛肉面制作的几大部分 底料熬制--牛肉浇头卤制--高汤熬制--碗底料配制--浇汤煮面 一.牛肉面底料熬制部分 食材:牛油5斤,鸡油1斤,猪油1斤,大葱100克,大蒜50克,洋葱100克,生姜50克,辣 ...

  • 细胞基因敲除方法及步骤

    我们知道在mRNA翻译成蛋白质的过程中,组成蛋白质的氨基酸是由三个相邻的碱基决定的,而mRNA的起始密码子一般是AUG.当翻译开始后,核糖体从AUG开始翻译,并且沿着mRNA进行移动,每相邻的三个碱基 ...

  • 冻存细胞方法及步骤

    一.资料 (一)仪器 1. 净化作业台 2. 离心机 3. 恒温水浴箱 4. 冰箱(4℃.-20℃.-70℃) 5. 倒置相差显微镜 6. 培育箱 7. 液氮冰箱 (二)玻璃器皿 1. 吸管(弯头.直 ...

  • 安葬择日的正确方法与步骤

    安葬择日的正确方法与步骤