腹腔注射台盼蓝苏木精伊红染色法显示巨噬细胞、肥大细胞、胶原纤维和弹性纤维

台盼蓝苏木精伊红染色法

方法：

⑴取大白鼠（体重250~300克）或小白鼠（25克）皮下或腹腔注射0.2~0.5%台盼蓝（Trypan blue）水溶液或生理盐水（stroke-physiological saline solution）溶液，注射量：每次注射2~3毫升/公斤体重，每天一次，连续注射3~6天。

⑵杀死动物前3~4小时再注射一次。

⑶断头或颈部放血，取肠系膜和肠管铺在云母片上。

⑷以Helly液或酒精甲醛醋酸液（FAA或AFA）固定30~60分钟。

Helly液：蒸馏水100毫升，加入重铬酸钾（红矾钾，Potassium dichromate）2.5克，升汞（二氯化汞、氯化汞、氯化高汞，Mercury dichloride）5克，煮沸溶解。用时加40%甲醛（蚁醛、福尔马林，Formaldehyde ）水溶液5毫升。又称Zenker-Formol液。固定细胞质较好，特别适于显示某些特殊颗粒如胰岛和脑垂体腺细胞。

FAA液：甲醛（Formaldehyde ）10毫升，95%酒精（Alcohol）或无水酒精（Absolute alcohol; Anhydrous alcohol）80~90毫升，冰醋酸（ Glacial acetic acid，GAA）5~10毫升

⑸固定后处理：Helly液固定，流水冲洗1小时，70%酒精加少量碘酒（Iodine）脱汞至无色，入5%硫代硫酸钠（次亚硫酸钠、大苏打、海波，Sodium Thiosulfate）水溶液处理，水洗；

AAF或FAA或AFA液固定者，水洗两次。

⑹用1%地衣红液37℃温箱染弹性纤维15~30分钟。

地衣红染液：地衣红（苔红素，Orcein）1克，70~80%酒精100毫升，硝酸（Nitric acid）或盐酸（Hydrochloric acid）1毫升

⑺流水冲洗，蒸馏水洗。

⑻Ehrlich苏木精染细胞核，水洗。

Ehrlich苏木精染液：苏木精（Hematoxylin）2克溶于95%酒精100毫升，加蒸馏水及纯甘油（丙三醇，Glycerine）各100毫升，钾明矾（明矾、白矾、钾矾、钾铝矾，钾铵明矾，Aluminium potassium sulfate，Potassium alum) 3克及冰醋酸10毫升，溶液呈红色。用纱布封闭瓶口，两周后成熟，溶液呈暗红紫色。适于块染（用水或50%酒精稀释4~5倍，染1~2天）。

⑼伊红染细胞质，水洗。

⑽快速经95%酒精两次分色兼脱水，无水酒精脱水两次各2分钟。

⑾用吸水纸吸干铺片。

⑿入石炭酸（苯酚，Carbolic acid）二甲苯（Dimethylbenzene）脱水，二甲苯透明。

⒀镜检，如结果满意，将肠管剪下，将肠系膜剪成小片或四边形，用玻片插入二甲苯中，  将小片组织用镊子捞在洁净的载玻片上，滴树胶加盖玻片封固，温箱烘干。

结果：

细胞核（Nucleus  ）呈蓝紫芭或黑色；

细胞质（Cytoplasm）红色；

巨噬细胞（Macrophage）胞质内有蓝色的吞噬颗粒；

成纤维细胞（Fibroblasts ）淡灰蓝色，有少量吞噬颗粒；

胶原纤维（Collagenic fiber）红色；

弹性纤维（Elastic fibers）红褐色。

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肝脏Kuffer细胞显示法

方法：

⑴选择大小鼠、兔、豚鼠等腹腔注射台盼蓝液若干次。300克动物总量10毫升。大白鼠注射：第一次0.5毫升，以后每天1~1.5毫升，七天后其皮肤 、巩膜、鼻尖处可见较深的蓝色，按常规方法杀死动物。

试剂配制：

台盼蓝0.5克，蒸馏水100毫升，过滤于锥形瓶内。用洁净的棉花塞紧瓶口，在沸水内消毒10~15分钟。

⑵取肝脏组织固定于10%甲醛水溶液。

⑷常规脱水透明、石蜡包埋，切片8微米。

⑸切片贴片（水温45~50℃），烘干（70℃1~2小时或37℃24~72小时）。

⑹切片常规脱蜡，经各级酒精下行入水。

⑺入卡红液核细胞核数分钟，水洗。

卡红液：卡红（Carmine)2克溶于5%铵明矾（铵明矾、铝铵矾、铵矾，Aluminium ammonium sulfate）100毫升，煮沸1小时，加水至100毫升。

⑻常规脱水，透明，封片。

结果：

Kupffer细胞胞质内有大小不等的蓝色颗粒（台盼蓝）；细胞核红色。