磁珠法分离400-600bp DNA片断的步骤
当前主流观点认为,处于PEG和盐离子环境中的DNA,因脱水作用而发生分子构象改变后,会暴露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团,与表面带负电荷的羧基磁珠结合。负负电荷之间的作用是由于带正电荷的盐离子的作用(如Na+;图2)。带负电的磷酸基团借由解离的盐离子(如Na+)与羧基形成离子桥,使DNA被特异性吸附到羧基磁珠表面。当PEG和盐类被去除之后,加入水性分子,会快速充分水化DNA,解除其三者之间的离子相互作用,使得吸附到磁珠的DNA被纯化出来。
操作的具体步骤如下图3(0.6x代表DNA溶液体积的0.6倍;该倍数要依据各自不同的实验体系自行检测调整):
磁珠法分离400-600bp DNA片断的步骤
如果只是分离纯化单条带PCR产物,我们通常使用1.2x的磁珠,与PCR产物在EP管内混合后放在磁力架上1分钟,丢弃上清,70%酒精洗涤两次后室温干燥,然后将EP管从磁力架上取下,TE或者纯水与磁珠混合,然后放回磁力架取上清,整个过程耗时约15分钟。
磁珠DNA分离法中多次使用了磁力架,来使磁珠聚合并方便除去洗脱液。一般进口磁力架(针对EP管或者96孔PCR板)约1000-5000人民币,而我们实验室(中国海洋大学海洋生物多样性与进化研究所-进化基因组学研究室)能够通过3D打印机自行打印并使用了稀土材料制作的高强永磁铁,效果甚至好于商业化产品。
功能化磁珠 | 羟基磁珠 |
羧基磁珠 | |
氨基磁珠 | |
环氧磁珠 | |
甲苯磺酰基磁珠 | |
提取核酸磁珠及配套试剂 | 羟基磁珠(二氧化硅磁珠) |
羧基磁珠 | |
DNA片段分选纯化磁珠 | |
oligo(dT)磁珠 | |
PCR产物纯化磁珠 | |
多合一核酸提取试剂盒-磁珠法 | |
链霉亲和素磁珠 | |
全基因组核酸提取结合液 | |
游离循环/病毒核酸提取裂解结合液 | |
免疫检测磁珠及配套试剂 | 羧基磁珠 |
氨基磁珠 | |
环氧磁珠 | |
链霉亲和素磁珠 | |
ALP碱性磷酸酶化学发光底物 | |
Flag标签抗体磁珠 | |
GST标签蛋白纯化磁珠(GSH磁珠) | |
His-tag标签蛋白纯化磁珠(镍磁珠) | |
ProteinA磁珠 | |
ProteinG磁珠 | |
StrepTactin磁珠(纯化Strep tag II标签蛋白) | |
磁珠偶联抗体(蛋白)封闭液 | |
磁珠偶联抗体(蛋白)试剂盒 | |
电化学发光链霉亲和素磁珠 | |
甲苯磺酰基磁珠 | |
碱性磷酸酶 | |
抗FITC荧光素抗体磁珠 | |
免疫磁珠保存液 | |
进口品牌磁珠 | 羧基磁珠/Agliant链霉亲和素磁珠 |
羧基磁珠和Merck链霉亲和素磁珠 | |
Sera-Mag® Magnetic SpeedBeads™ Carboxylate-Modified Particles | |
抗体磁珠 | CD2抗体磁珠 |
CD3抗体磁珠 | |
CD4抗体磁珠 | |
CD8抗体磁珠 | |
CD14抗体磁珠 | |
CD15抗体磁珠 | |
CD19抗体磁珠 | |
CD25抗体磁珠 | |
CD31抗体磁珠 | |
CD34抗体磁珠 | |
CD45抗体磁珠 | |
Flag标签抗体磁珠 | |
GFP标签抗体磁珠 | |
GST标签抗体磁珠 | |
HA Tag抗体磁珠 | |
His标签抗体磁珠 | |
HSV Tag抗体磁珠 | |
Myc标签抗体磁珠 | |
抗FITC荧光素抗体磁珠 | |
山羊抗兔IgG抗体磁珠 | |
山羊抗小鼠IgG抗体磁珠 | |
鼠抗人IgG抗体磁珠 | |
鼠抗兔IgG抗体磁珠 | |
兔抗人IgG抗体磁珠 | |
兔抗鼠IgG抗体磁珠 | |
磁珠磁力架 | 0.2ml八联排管磁力架 |
0.4ml/0.5ml磁力架 | |
1.5ml磁力架/2ml磁力架 | |
2ml磁力架(平底) | |
4ml/5ml磁力架(尖底和圆底) | |
10ml磁力架 | |
15ml磁力架 | |
50ml磁力架 | |
96孔PCR板磁力架 | |
96孔酶标板磁力架 | |
96孔深孔板磁力架(1.2ml和2.2ml) | |
磁力板(试管专用) | |
磁力架多管混匀器 | |
多功能磁力架 | |
万能磁珠控温混匀器 | |
偶联标记技术服务 | 抗体(蛋白)和磁珠的标记 |
磁珠和寡核苷酸探针的标记 | |
小分子和抗体(蛋白)的标记 | |
抗体(蛋白)的纯化 | |
抗体 | HRP标记的抗体 |
Biotin标记的抗体 | |
Fitc标记的抗体 | |
AU标记的抗体 | |
所有常见二抗 | |
所有常见一抗 | |
抗荧光素抗体(FITC抗体) | |
HRP标记小鼠抗人IgG二抗 | |
HRP标记山羊抗人IgG二抗 | |
AP标记山羊抗人IgG二抗 | |
AP标记小鼠抗人IgG二抗 | |
c-Myc / Myc Tag | |
CBP Tag | |
E2b Tag | |
Flag / DYKDDDDK Tag | |
GFP pAb | |
GFP Tag | |
GST Tag | |
HA Tag | |
His Tag | |
HPC4 | |
HSV Tag | |
MBP Tag | |
SUMO Tag | |
T7 Tag | |
Tag-100-Tag | |
V5 Tag | |
VSV-G Tag | |
层析空柱 | 不锈钢空色谱柱 |
有机玻璃层析空柱加工定做 |
wyf 02.01
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