新技术合成 Peptide-DNA材料

闲白：单纯的多肽研究，单纯的DNA或RNA相关结构的研究，已经满足不了广大科研工作者的需求，前段时间一位在读博士提到过 多肽和DNA连接，小编也找不到其它素材可以写了，于是今天就这个Peptide-DNA的合成，总结一下这方面的知识。

先来一张合成步骤图。

一、所需材料

1）amine-modified DNA: 氨基修饰的DNA，在水中溶解至终浓度为1mM并储存在-20℃。 文中序列为如下

2）DIBAC-sulfo-NHS：溶解在干燥的DMSO中至最终浓度为100mM并储存在-20℃。结构如下

3）Fmoc-FF-PEG₂-K^az-NH_2：即Fmoc-Phe-Phe-PEG2-Lys(N3)-NH2：可以是其它肽段，重点是赖氨酸侧链带有叠氮基团，并且肽段的活性基团都被保护起来。文中结构如下

二、合成

1）氨基修饰的寡核苷酸（1mM在H 2 O中）稀释到pH 8.5的20mM磷酸盐缓冲液中。加入DIBAC-sulfo-NHS（在DMSO中100mM）过量加入溶液，混合物在室温下剧烈振荡反应4小时温度。使用3kDa Amicon Ultra-0.5过滤器单元过滤所得溶液。

2）将缓冲液更换为pH 8.5的新鲜100mM磷酸盐缓冲液。将DIBAC-sulfo-NHS在4℃下轻轻摇动过夜。

3）溶解Fmoc-FF-PEG₂-K^az-NH_2，在DMSO中至终浓度为5mM，并以2：1的比例加入到DNA-DIBAC溶液中。加入水和1M NaCl以使反应混合物达到100mM NaCl溶液和20mM pH 8.5为磷酸盐缓冲液。将反应混合物在37℃温和搅拌过夜。

4）将溶液用50mM TEAA缓冲液pH 7.0交换，浓缩在反相HPLC（InspireC185μm，250 x 4.6 mm色谱柱）上纯化，纯度为5-80％

梯度为50mM TEAA缓冲液（pH7.0）的H 2 O溶液（溶剂A）和90％乙腈水溶液（50）mM TEAA缓冲液pH 7.0（溶剂B）。

5）确认了PEPDNA的特性和纯度，通过ESI-MS（ThermoScientific Q Exactive HF-X）和MALDI（AB Sciex 5800 MALDITOF / TOF）。使用260nm处的吸光度测量法定量pepDNA，冻干以等分试样并储存在-20℃。

三、最终产物图谱