pBR322 DNA是什么？

pBR322是第一个人工质粒载体，广泛用于基因克隆实验（Bolivar et al., 1977）。在这之前，人们使用天然质粒进行早期克隆实验，如pSC101、ColE1等。pBR322的出现，迅速成为基因克隆实验的流行选择。pBR322的长度为4361 bp，共含有2个抗性基因、1个Rop基因和1个复制起始点。2个抗性基因是氨苄青霉素抗性（AmpR）基因和四环素抗性（TetR）基因。Rop基因编码限制pBR322质粒拷贝数的蛋白。Rop基因与复制起始点都来自pMB1天然质粒，属于ColE1质粒家族，这类质粒的复制是由RNA I产物起始的，在宿主没有蛋白质产生的情况下依然能复制，属于relaxed control型质粒，所以能利用氯霉素提高质粒产量。该载体上具有单限制性酶切位点四十多种，其中在AmpR和TetR基因均有单限制性酶切位点，在上面插入外源基因片段后会导致抗性基因失活，可实现抗性筛选。