名老中医刘志明滋肾活血方对大鼠缺血心肌蛋白质组学及分子机理研究
滋肾活血方是国医大师刘志明从医70余年治疗冠心病的有效原创方。冠心病属中医“胸痹”范畴,刘老对胸痹病机认识提出独到见解,并凝炼出三法“补肾、通阳、祛邪”。临床多年辨证施用,效如桴鼓。该方由首乌、桑椹、栝楼、薤白、三七等组成,并申请了国家专利(专利号：201110268875.6),前期完成了多项国家级多中心临床研究及基础研究。临床研究疗效确切,安全可靠。临床实验研究能降低其血浆hs-CRP、MMP-9、IL-6、HCY水平,改善缺血性心电图,降低血脂、炎性标志物、纤溶指标,保护血管内皮,稳定动脉斑块。冠心病对人类生命健康构成严重威胁。我国每年有超过70万人死于冠心病,其患病率和死亡率持续攀升,给人民生活和国家财政带来极大负担。西医内科主要从扩冠、抗凝、抗血小板聚集、病因治疗及生活调理等方面防治冠心病,重症患者行血管重建术,如冠状动脉旁路移植术(CABG)或经皮冠状动脉介入治疗(PCI)等。西药耐受性也因人而异,长期服用副作用较大,患者难以长期坚持服用,外科治疗方法亦有再狭窄可能,中医药治疗冠心病从本论治、整体治疗,具有副作用小、标本兼治、价格低廉等优势,因此寻求有效安全的中医药防治冠心病及减少术后再狭窄是目前研究的重要课题之一,尤其挖掘名老中医治疗冠心病经验的研究具有重要的临床意义和价值。本研究在北京市自然基金平台上完成(项目名称：名老中医滋肾活血方对鼠缺血心肌蛋白组学及分子机理研究,编号：7122153),具体研究如下。实验研究：实验目的：本项目从大鼠心电图、心肌病理形态变化及血管舒缩因子、信息通道调控因子角度验证滋肾活血方治疗肾虚血瘀型冠心病的疗效,同时通过筛选差异表达蛋白探讨滋肾活血方治疗冠心病心肌缺血的分子生物学机制。为名老中医刘志明治疗冠心病验方临床应用提供科学依据,同时为冠心病的预防和治疗提供诊疗新思路。研究方法：以结扎冠脉结合中医证候模型制备方法制备的冠心病心肌缺血肾虚血瘀型大鼠为研究对象,运用双向凝胶电泳及四级杆飞行时间串联质谱分析技术筛选该病证与正常组之间的差异表达蛋白,观察滋肾活血方对模型大鼠心肌差异蛋白表达影响；同时运用蛋白质印迹法检测凋亡相关因子热休克蛋白27、促分裂素原活化蛋白激酶p38表达,酶联免疫吸附试验测定模型大鼠血浆内皮损伤因子一氧化氮、内皮素及炎症因子白介素-18水平。结果：1病证结合模型制备：与空白对照组比较,病证结合组、肾虚血瘀组体重减轻或者增长缓慢、体温下降、呼吸频率加快、全血黏度、卡松粘度升高(P<0.05,P<0.01);2组大鼠造模前、后比较均有呼吸频率增加、体温降低(P<0.05);对比病证结合组与肾虚血瘀组,全血粘度、心电图有统计学差异(P<0.05)。2心电图和病理形态学变化比较：滋肾活血方可以预防肾虚血瘀模型大鼠缺血心肌坏死性Q波产生、改善缺血ST-T改变,减轻心肌损伤。也能减轻肾虚血瘀模型大鼠心肌病理形态学的损伤,肾虚血瘀模型大鼠心肌纤维肿胀变形,组织疏松水肿,炎细胞浸润较多；心肌细胞肿胀变性,坏死明显,有核溶解,部分可见核消失；大量胶原纤维组织增生。心内膜和心外膜均出现不同程度的炎细胞浸润及血管肿胀、变性。3动脉斑块因子和炎症因子检测：滋肾活血方能降低血浆中内皮素及白介素18含量,升高一氧化氮水平。相比空白对照组,模型组血浆内皮素、白介素18浓度升高明显,一氧化氮浓度下降明显,均具有显著性差异(P<0.01)。相比模型组,各给药组血浆内皮素浓度均不同程度降低,高剂量与中剂量相对于模型组亦均有显著性差异(P<0.01)；与模型组比较,不同剂量给药组血浆白介素18浓度均有降低,高剂量差异显著(P<0.01),中、低剂量组差异有统计学意义(P<0.05)；对照模型组,不同剂量滋肾活血方灌胃组均不同程度升高血浆一氧化氮浓度,高剂量相对于模型组有显著性差异(P<0.01),中、低剂量相对于模型组有统计学差异(P<0.05)。三组之间比较,血浆内皮素浓度随着给药浓度增加而降低,组间比较均有显著性差异(P<0.01)；随着给药浓度增加血浆白介素18浓度降低,中、低剂量组相对高剂量组有显著性差异(P<0.01)；高剂量组血浆一氧化氮浓相对于中剂量组有统计学差异(P<0.05)。4凋亡相关因子检测：对比空白对照组,模型组热休克蛋白27表达减少(P<0.01)；模型组促分裂素原活化蛋白激酶p38表达增多(P<0.01)。与模型组比较,不同剂量给药组热休克蛋白27灰度值均有不同程度增加；各给药组促分裂素原活化蛋白激酶p38降低(P<0.05)。说明心肌缺血使热休克蛋白27在心肌组织中含量下降、促分裂素原活化蛋白激酶p38表达增高,而滋肾活血方能升高热休克蛋白27在心肌组织中的含量,降低促分裂素原活化蛋白激酶p38的表达。5筛选差异蛋白：与空白对照组相比,模型组共找到66个差异蛋白点；与空白对照组相比,模型组、滋肾活血方各剂量组使其逆转的作用靶点蛋白质5个。滋肾活血方下调的蛋白有乳酸脱氢酶B链,肉碱棕榈酰转移酶-2,异柠檬酸脱氢酶,上调的蛋白为ATP合酶α亚基,肌凝蛋白-6。结论：1“手术联合注射氢化可的松法”制备冠心病心肌缺血肾虚血瘀病证结合模型与非疾病肾虚血瘀证候模型的中医肾虚血瘀证诊断均成立,2组中医证候比较未见明显差异。2滋肾活血方对冠心病心肌缺血肾虚血瘀型大鼠心电图所示的心肌缺血有改善作用；可以减轻肾虚血瘀模型大鼠缺血心肌病理形态学的损伤,调节心肌功能,达到改善冠心病心肌缺血肾虚血瘀证的功效。3滋肾活血方能减少内皮素合成并增加释放,抑制白介素18介导的炎性反应,促进一氧化氮合成,通过抗炎、稳定动脉斑块,扩张血管,减轻心肌缺血程度,从而达到改善肾虚血瘀证冠心病心肌缺血的治疗作用。4滋肾活血方促进热休克蛋白27、抑制促分裂素原活化蛋白激酶p38在心肌组织的表达,抑制心肌细胞凋亡,减少炎症反应,调节应激因子和细胞通道因子,在治疗缺血性心脏病方面起到积极作用。5冠心病心肌缺血肾虚血瘀模型大鼠心肌蛋白质组学发生变化,这些差异蛋白点可能是冠心病心肌缺血发生发展的分子基础；滋肾活血方在一定程度上调节肾虚血瘀型冠心病心肌缺血模型大鼠心肌组织蛋白质组学变化,其干预机制与抑制心肌脂肪酸代谢,刺激葡萄糖代谢,增加ATP能
量供应、保护细胞骨架等功能相关。综上所述,滋肾活血方能改善冠心病肾虚血瘀型大鼠心肌缺血,有效的抑制炎症反应,减少心肌细胞凋亡,稳定动脉斑块,提高心肌能量代谢,保护细胞骨架。本研究为滋肾活血方治疗肾虚血瘀型冠心病心肌缺血提供了科学依据,为进一步探索该方药理作用机制指明方向并奠定了良好基础。...
临床用药喜用药对,如生晒参与生地黄,瓜蒌与薤白,丹参与三七。善用瓜蒌薤白半夏汤,生脉散,丹参饮等方化裁。 2.名老中医经验方冠心爽合剂治疗冠心病心绞痛(肾阴亏虚,心阳瘀阻型)