怎样选择合适的二抗？

二抗是在其他宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标记物。二抗针对某一特定物种的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继实验中也会有不同的检测方案，如ELISA、WB、IHC、IF、IP、Flo等，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：

一抗的种属来源：

二抗应根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗，例如：如果一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗。

一抗的类别与亚型：

二抗需与一抗的类别或亚类相匹配，通常是针对单克隆抗体而言。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类，那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG,或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗。

二抗的种属来源：

二抗的种属来源与其质量没有必然的联系，不同来源的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果两个一抗一个山羊来源，一个小鼠来源，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。

二抗的耦联标记：

耦联到二抗上的标记主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC、PE、Dylight等），生物素，金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于WesternBlot和ELISA，常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学、组织免疫化学、流式细胞术）中常用荧光基团标记的二抗；免疫组化中也可以使用HRP或AP标记的二抗。

二抗的纯度：

亲和层析纯化相对于传统的血清纯化、盐沉淀等方法更加高效，得到的抗体纯度较高，产生的非特异性背景少，所以亲和层析纯化的抗体一般更受人们欢迎。

血清吸附处理：

经过血清吸附过的二抗排除了与相关物种组织可能发生非特异性反应的免疫球蛋白，因此将二抗与样本的非特异性结合降低到最低。如经过人血清吸附过的二抗，在检测过程中就不会与样本中人的免疫球蛋白发生交叉反应。