组织学技术 浸蜡、包埋、切片、粘片

一、浸蜡

新蜡含气体和少量水分，反复加温使气体和水分排去。蜡温比石蜡熔点高2~3℃

软蜡：48~52℃

硬蜡：56~62℃

3~5毫米组织浸蜡2~3小时。肝、脾等组织减少浸蜡时间；脂肪组织及纤维较少的组织延长时间。

较大组织块先浸于二甲苯或苯-石蜡混合液（1：1）于40℃数小时再浸蜡。

方法：

①浸软蜡30~45分钟-->浸硬蜡45~60分钟-->包埋

②浸软蜡30分钟-->硬蜡Ⅰ35分钟-->硬蜡Ⅱ25分钟-->包埋

③浸软蜡Ⅰ10~15分钟-->软蜡Ⅱ10~15分钟-->硬蜡45~60分钟-->包埋

④浸软蜡Ⅰ10~15分钟-->软蜡Ⅱ10~15分钟-->硬蜡Ⅰ20~30分钟-->硬蜡Ⅱ30~40分钟-->包埋

二、包埋

包埋蜡倒入包埋框（底模，模具比组织略大2~3毫米）内，快速将组织放入蜡液内，切面朝下，固定位置，冷却后凝固成蜡块

三、切片

主要仪器：切片机（Leica RM2145或Leica RM2245)

包埋框包埋的蜡块，用解剖刀修整成长方形或正方形，保留蜡边2~3毫米。

底模包埋的蜡块一般不用修整。

将蜡块夹在切片机的标本夹，拧紧螺旋

安装刀片。

调到TRIP模式（修切），设置修切厚度。松开切片机锁。

根据蜡块表面与刀片的距离，松开底部的锁，内眼观察，慢慢移至两者相距很近。

打开旋转手轮，进入快进模式↑或↑↑。使切面与刀片接触（稍紧），如术过，使用↓或↓↓。不能碰到刀片。

旋转手轮，切下组织，使切面表面的组织全部能切到。

转到SECT模式（切片），均匀切片，蜡片一片片连在一起称蜡带。

用毛笔将蜡带移到切片板上。

四、展片（粘片）

主要仪器：摊烤片机、电热恒温培养箱

主要是水（酒精）捞法

用解剖刀或手术刀片将蜡带分离或切成小片。

用镊子夹入冷水中，亮面朝下。

待组织基本平展，移入加热至45~60℃热水中，蜡片展开。

用镊子将未展平的部分拉开，使组织完全展开展平。

立干水份，放入烤片机（60~70℃ 1~2小时）或37~40℃温箱（24~48小时）烤干

附：硬蜡切片制作仪器

磁力搅拌器———配制难溶试剂

电热恒温培养箱——烤片电热恒温干燥箱——玻璃器皿或手术器械烘干、切片染色加温

Leica RM2145或2245切片机——蜡块切片

摊烤片机————蜡片展片

Leica EG1150包埋机——————组织块包埋

机械式微波炉————冬天脱水、透明、染色加热