FLEX条件性表达腺病毒载体（Cre-Switch）

FLEX Cre-switch系统由两对异型Lox-变体重组位点组成，其中野生型序列称为LoxP，突变体称为Lox2272，分别位于两个基因ORF的两侧。 两个ORF相互反向，其中一个ORF具有正确的读码方向（相对于启动子）。两种Lox-变体都可被Cre识别，但只有相同的Lox位点对可以彼此重组，与其他Lox-变体不能进行重组。LoxP和Lox2272位点以交替方式位于两个ORF两端，每对位点互为反向。Cre重组酶不存在的情况时，第一个ORF由于其编码方向与启动子方向相同，可以在客户定制的启动子驱动下正常表达，而第二个ORF由于其方向相反则无法正常表达。在Cre的存在下，LoxP和Lox2272位点对分别重组，导致两个ORF方向反转，且其中的一对重组位点将具有相同的方向，Cre会介导产生正向重组切割，继而分别留下一个不同的重组位点。 ORF方向的反转，使得第二个OR可以在启动子的驱动下正常表达，而第一个ORF将不表达。 由于ORF侧翼是两个不同的Lox-变体位点，所以即使存在Cre也不会进一步发生重组。

腺病毒载体首先是以质粒的方式构建并使用E. coli扩增，然后线性化后转染进入包装细胞。在包装过程中，位于两个反向重复序列（ITR）之间的DNA片段与由包装细胞表达的病毒蛋白进一步包装成病毒颗粒。对于上述的FLEX介导的Cre-Switch条件性表达腺病毒载体，FLEX Cre-Switch开关位于两个ITR之间。当病毒转导宿主细胞时，载体并以游离DNA的形式存在于细胞核中。

通过改造优化，我们的腺病毒载体缺失了E1A、E1B和E3区，前两者与病毒包装相关（这两个基因已被整合到包装细胞的基因组中）。因此，运用我们的病毒载体包装出来的病毒是复制缺陷型的（只能转导靶细胞而不能自我复制），大大提高了生物安全性。