细胞冻存实验原理及步骤

冻存的细胞要处在指数生长期。悬浮细胞和贴壁细胞经离心后用冻存液重悬，计数，冻存的细胞密度一般3*106-1*107 cells/ml，最好不少于1*106 cells/ml，否则复苏后难以养起来，将重悬计数后的细胞悬液以1-1.5ml快速分装至各冻存管中，迅速拧紧盖子，放入梯度冻存盒然后置于-80℃过夜，也可以先4℃放置30分钟，再-20℃放置1-2小时，最后-80℃过夜（16-18小时），若梯度冻存盒不够或无冻存盒，可以将冻存管置于泡沫盒中，用棉花包起来，棉花厚度约1cm，置于-80℃过夜，第二天取出-80℃细胞存放至液氮罐中，并在记录好存放位置信息。

冻存准备

●配制好冻存液。一般冻存液为培养液，血清，DMSO按照7:2:1的比例配制，也可以血清和DMSO按照9:1配制，不管哪种冻存液配制，血清多多益善，但DMSO都不可以多，以免对细胞造成损伤。

●准备好冻存管，标上细胞名称，代次，冻存批号，冻存日期。

●准备好细胞程序降温盒或冻存用的材料，程序降温盒放置室温后使用。