关于多肽的一些基本常见知识

保存

大多数多肽在-20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中，在将它们暴露于空气之前，冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。

对于含Cys, Met orTrP的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽可易空气氧化，在封瓶前，慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比，生命期有限。

溶解性

大多肽的道选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽，需要DMF、脲、guanidiniamchloride或acetonitnle来溶解，这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。

残基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val将全增加多肽的溶解难度。

保存操作

包装 1mg或更少的多肽按净重包装，声明的小瓶重不含相关抗离子和水。 例如，氨基酸分析决定的肽含量是80%，在1mg样品中，那么瓶中毛重是1.25mg。

大量的多肽以毛重算。标出的重量含相关抗离子和水，例如，25mg样品中肽百分比为90%，那么，实际肽量为25mg×90%=22.5mg

不要把肽含量和纯度搞混了。肽的纯度可能是100%， 而肽含量相关带电基团（如Arg, Lys）的抗离子量和肽新水性决定。这是合成肽的本身特性。

冻干肽的保存

所有产品应存于冰箱， 最好为-20℃。多数肽以此方法可以存放几年不变。

肽溶液的保存

溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性pH(pH5-7), -20℃保存的，为避免样品的反复冻融，最好分成小样存放。一份样品融冻后未用完， 应扔掉，细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦， 为克服此，肽应溶于无菌水， 或肽溶液用0.2μM滤膜过滤。

多肽的重建和操作

多数肽溶于无菌蒸溜水。初次溶解时，要注意使初始浓度比要求浓度大，如果多肽仅有限溶解性，这便允许加入其它溶解剂或缓冲盐。

如果多肽在水中的溶解性有限，有几种选择可帮助溶解：

对碱性肽用稀乙酸（含Arg , Lys , His）

酸性肽用稀氨水（含Asp, Glu）

对极疏水的肽用10%有机修饰物（Acetonitnile , Methanol）

极不溶的肽用DM50或DMF

guanicline hydrochloride或脲的浓溶液也很有用， 与上述方法合用， 声处理也是溶解多肽的有效手段。

多肽的包装

目录中所有多肽除特别说明外，纯度为95~98%。包装为小瓶冻干粉。除特别注明外，多肽净重包装， 例如，1mg瓶的β-amyloid1-40精确含1mg的多肽。多肽净重由氨基酸分析得到的肽含量计算。例如，一个多肽样品毛重5mg，氨基酸含量85%，多肽净重为5mg×0.85=4.25mg。

请注意，多肽含量不是多肽纯度，与抗离子象乙酸盐和溶剂，特别是水结合量合成多肽的本身特性。多肽纯度可能达100%，但合成品中多肽含量由氨基酸组成，硫水性，和多肽对溶剂和离子的暴露决定，特别是在纯化过程中，无论多肽如何纯，冻干粉多肽含量一般为70-85%。剩余15-30%由其它基本非肽成份构成。

多肽应用保存

多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了最太肽外，这点都会发生，在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率，可用声处理。溶解仍有问题，加少量稀乙酸（10%）或氨水，会便于溶解。

要长期保存多肽， 最好冷冻干燥，冷干粉可在-20℃或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。多肽易受细菌降解，应用无菌纯化水溶解。

含有Met, Cgs或Try残基的多肽溶液由于氧化，寿命有限。应溶于无氧溶剂， 为防止重复冻融的破坏，建议溶解过量的肽的便实验，其余多肽以固体形成保存。

固相多肽合成Fmoc方法

任何多肽链的关键连接为肽键，由一个氨基酸的氨基与另氨基酸的缩合形成。通常一个氨基酸由一个中心碳原子组成，它由四个基它基团包围： 氨基、羰基、基和侧链。 侧链，称为R，区别不同氨基酸的结构。某些侧链含有干扰肽键形成的功能团。因此侧链功能团的封闭很重要。

上图显示了Fmoc合成的一般流程，首先第一个Fmoc氨基酸通过一个酸性接头接到不溶载体树脂上，Fmoc去保护通过用碱处理树脂来完成，一般是Poperidine。 用预先激活或原位激活连接第二个Fmoc氨基酸。要求总多肽合成后，通过TFA分离来除去树脂和去保护。

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