慢病毒包装实验流程介绍

慢病毒包装流程：

　　1、载体质粒与系统质粒共转染293T细胞。

　　2、收集48~72h的细胞上清液。

　　3、超速离心纯化浓缩。

　　4、纯化分装。

　　5、滴度检测。

慢病毒包装具体实验步骤如下：

　　一、质粒转染

　　1、转染前，依次准备好转染试剂、Opti-MEM培养基、目的质粒、骨架质粒、EP管。

　　2、然后，配置质粒和OMEM的混合液。

　　3、配置转染试剂和OMEM的混合液。

　　4、轻轻混匀，静置5min。

　　5、将配好的质粒与转染试剂混合后形成转染体系。

　　6、轻轻混匀，静置20min。

　　7、从培养箱中取出10cm培养皿，弃去培养液，更换为OMEM培养液。

　　8、转染，轻轻混匀。

　　9、在培养皿盖上做好标记，放回培养箱继续培养。

　　10、转染后6-8h，更换为新鲜的DMEM培养基。

　　11、转染后次日，显微镜下观察转染效率。

　　12、转染后48h，收集上清液于干净的50ml离心管中。

　　13、加入新鲜的DMEM培养基，继续培养。

　　14、转染后72h，再次收集上清液。

　　二、浓缩纯化

　　1、将收集好的上清液离心，弃去细胞碎片。

　　2、用0.22μm滤膜过滤，分装到超速离心管中。

　　3、超速离心。

　　4、离心结束后，将所收获的病毒颗粒重新悬浮，于4℃冰箱中溶解，过夜。

　　5、次日，再次将溶解后的病毒过滤、分装、入库。