RNA荧光原位杂交实验技术服务

【技术原理】

RNA-FISH原理：如果待检测的细胞或组织切片上的靶核酸与所用的核酸探针是同源互补的，二者经‘’变性-退火-复性‘’，即可形成靶核酸与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素或直接标记荧光素，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应或直接经荧光检测体系在镜下对待测核酸（mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA）进行定性、半定量或相对定位分析的一种实验方法。

【实验流程】

注意事项

1、烤好的组织切片需经过脱蜡处理，二甲苯脱蜡不足会导致探针杂交强度和杂交效率降低、荧光背景高等，影响实验结果。可根据实际情况延长脱蜡时间。

2、酶消化注意事项：

①酶的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高，会对细胞的结构有一定的破坏，细胞核消失或细胞核辨认不清，也会造成一定程度的组织脱片；

②酶消化不足会造成蛋白消化不透彻，降低组织的通透性以及杂交信号的强度和杂交率；

③消化酶均为现用现配。

3、由于荧光原位杂交探针杂交的区段长，在组织或细胞块切片中，可能出现人为的信号异常，如缺失、分离等。