细胞培养污染怎么办？

细胞实验中，培养细胞一一旦污染，一般情况下，都会比较难处理。如果污染细胞作用不大，可以不要了；有细胞株留存的或可购置的，可在找到原因后进行的**操作室，复苏或者重新购置细胞，再进行培养。若污染细胞作业很大，又难于重新得到，可以实施以下办法进行**。

（一）使用***

***对杀灭**较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双***（青霉素100u/mL加链霉素100μg/mL），污染后**用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期可能有效。所用***品种除青霉素、链霉素外，还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四环素处理，每隔2～3日换液1次，传1～2代进行**。近年来有报道，4-氟，2-羟基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四环素衍生物（BM-2）等三种***单用或合用对杀灭支原体有效。这三种***均用PBS配成250X浓缩液，-20℃保存备用，使用浓度Cip为10μg/mL，BM-1为10μg/mL，BM-2为5μg/mL。使用时先吸除污染的培养液，加入含BM-1的RPMI1640培养液，3天后再吸除培养液，加入含BM-2的RPMI1640培养液，培养4天，如此连续3个轮次，直至用33258荧光染色镜检证明已**支原体后，再加正常培养液培养传代3-4次。

（二）使用支原体特异性血清

用5%的兔支原体**血清（血凝效价1:320以上）可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。但此法比较麻烦，不如用***方便、经济。

（三）加温处理

将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不佳影响。所以在处理前要进行预试验，摸索能大限度杀死支原体又对细胞影响小的加热时间。此法有时不可靠。若先用**处理后，再以41℃加温处理效果更佳。

（四）其他方法

除了上述去除污染的方法外，还有动物体内接种**法、巨噬细胞吞噬法、污染培养瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及过滤法等，但均较麻烦，且效果不确定。所以一旦支原体污染，除非有特别重要价值，一般均弃之重新培养。