七剑下天山之ASH 2018 LBA-7：BCl-2基因中鉴定出对Venetoclax耐药的突变

LBA-7  BCl-2基因发生的Gly101Val突变导致了进展性慢性淋巴细胞白血病患者对Venetoclax的耐药

研究背景：

Venetoclax能够通过抑制BCL2在重度治疗的CLL患者中引起高达80%的缓解，尽管可以获得深度持久的缓解，大多数患者还是会在治疗后疾病进展。体内引起Venetoclax耐药的分子机制还是未知。

研究方法：

从先前三个早期临床中接受Venetoclax治疗的67名复发性CLL患者身上，我们主要对那些CLL进展的患者进行基因水平评估，用含有恶性淋巴肿瘤突变相关的33个相关基因的panel对治疗前后的样本进行靶向扩增子的高通量测序。21名患者在中位值36mo（range 6-73）后发生CLL进展，对其中15人的样本进行了分析。

研究结果：

这15人中有7人的BCL2基因检测到单个杂合的核苷酸变异：NM_000633.2:c.302G>T, p.(G101V)。随后ddPCR显示，在Venetoclax治疗19-42mo后的低变异等位基因中首先检测到G101V突变，比达到进展的标准提前了高达25mo，但是在这些患者接受Venetoclax治疗前以及没有接受Venetoclax治疗的患者的样本中均未发现该突变。

为了研究G101V是否直接引起对Venetoclax的耐药，我们在2种B细胞淋巴瘤细胞株(RS4;11和KMS-PE-12)表达这个突变体，相比表达野生型BCL2的细胞对Venetoclax的敏感降低了30倍。G101V突变在亚致死浓度的Venetoclax中连续暴露3周后有了选择性的优势。在原发病人的G101V突变的细胞不管是短期生存分析还是在骨髓基质模型中培养都观察到相同的现象。基质中携带G101V突变的原代细胞随着浓度高于临床可达到的情况对Venetoclax的抗性显著提升。而在没有Venetoclax的情况下，G101V突变在保护细胞株免于凋亡和野生型BCL2一样有效。

在结合实验中，Venetoclax与BIM竞争结合G101V的能力相比野生型BCL2急剧降低了180倍，这很可能是VAL中较大的异丙基占了结合Venetoclax的沟。在细胞实验中，Venetoclax能够轻易的从野生型BCL2上解离BAX和BAK，但是当这些促凋亡分子结合到G101V后就失效了。

我们发现并非所有CLL进展的患者都携带G101V突变。有1个患者在进展时携带了独特的携带及不携带G101V突变。携带单独野生型BCL2的亚克隆在质谱流式细胞分析中发现升高的BCL-XL，而G101V突变的克隆中BCL-XL表达极少。这些结果提示，G101V突变虽然足以保证临床上对Venetoclax的耐药，但是在同个患者体内也存在其它的耐药的机制（比如wt BCL-2克隆中的BCL-XL升高）。

结论：

我们在Venetoclax治疗后出现CLL类进展的患者队列中鉴定出一个新的BCL2突变G101V并做了功能分析。G101V突变破坏了Venetoclax对BCL2的结合并引发了对Venetoclax的耐药，这在患者癌细胞和构建的细胞株中得到证实，同时体外实验中在药物存在的情况下相比野生型细胞有着选择性的生长优势。这个突变的发现为了解Venetoclax耐药的病理学提供了新的角度，同时也为临床上的复发提供了新的生物标志物。