hCD3ε 转基因小鼠技术原理

将人源 CD3ε 的编码序列构建到小鼠 CD3ε 启动子和增强子驱动的表达载体[3]，以确保人源 CD3ε 在小鼠体内的表达谱正确。通过显微注射建立人源化 CD3ε 的转基因小鼠。

人 CD3ε 转基因载体示意图FACS 分析小鼠外周血表明，人源 CD3ε 分子特异的表达在 CD3 阳性的小鼠 T 细胞。与野生小鼠相比，转基因小鼠的 T 细胞和 NK 细胞比例没有发生明显变化。T 细胞激活实验表明，人和鼠的 CD3ε 抗体都能激活转基因小鼠的 T 细胞。说明人源 CD3ε 在小鼠 T 细胞上表达和参与构成 CD3 分子复合物，而且可以被 hCD3ε 特异性抗体结合并激活 CD3 分子介导的 T 细胞活化信号，从而具有测试双特异抗体药物的功能。（1）流式分析 hCD3ε/Vst 小鼠外周血中 hCD3ε 的表达。

C57BL/6N 小鼠hCD3ε/Vst 小鼠（2）流式分析 hCD3ε/Vst 小鼠外周血中 B、CD4+T、CD8+T 和 NK 细胞的含量。

结果可见 hCD3ε 转基因，不影响 hCD3ε/Vst 小鼠 B、T 和 NK 细胞的分化。（3）分别使用小鼠和人 CD3ε 抗体处理 hCD3ε/Vst 小鼠（野生型 C57BL/6 为对照）后，免疫细胞反应的流式分析。

结果可见，人 CD3ε 抗体处理，在 hCDε/Vst 小鼠中可以有效地活化 T 细胞，而野生型 C57BL/6 小鼠只有抗小鼠的 CD3ε 抗体才能有效激活 T 细胞。确认人源 CD3ε 的表达特异性和功能正常之后，我们使用人源 CD3ε 转基因小鼠进行了双特异性抗体药效实验。

肿瘤生长曲线

小鼠平均体重曲线结果表明：测试的双特异性抗体 CS4、Y6 和 Y7 能够完全清除接种于 hCD3ε 小鼠上的肿瘤细胞，而生理盐水和另两种供试品 M-I,M-K 未能抑制肿瘤的生长，证明此模型可以有效的评估双特异性抗体的抗肿瘤药效。hCD3ε 小鼠背景为 C57BL/6N，为了能够同时接受 BALB/c 等其它遗传背景来源的小鼠肿瘤细胞，我们可采取与 BALB/c 等小鼠杂交一代的方式建立荷瘤模型。经过实验证明，该 F1 代小鼠就能够接受 BALB/c 品系来源的肿瘤细胞，且可以用于双抗的体内药效评价。通过此种方式，解决了接受其它品系来源的细胞问题，大大拓展了该小鼠的应用范围。为了配合人源 hCD3ε 小鼠应用于抗肿瘤双抗的药效评价，我们制备了部分表达目前研究热门的人肿瘤靶点分子的小鼠细胞系，并且可以根据需要，制备新的靶细胞。靶点细胞系小鼠背景肿瘤类型CD19A20BALB/c淋巴瘤CD20A20BALB/c淋巴瘤Her2CT26BALB/c结肠癌4T1BALB/c乳腺癌BCMAMPC-11BALB/c多发性骨髓瘤EpCAM4T1BALB/c乳腺癌LLCC57BL/6非小细胞肺癌