ChIP技术实验流程及方法
目前广泛使用的ChIP实验试剂盒,通常需要2-3天的时间完成一次完整的实验,简易流程如下:
第一天:
甲醛固定细胞→收集细胞,超声破碎或酶解法破碎细胞→加入目的蛋白的抗体,与超声后的靶蛋白-DNA复合物相互结合,过夜孵育;
第二~三天:
加入Protein A Agarose,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,并沉淀→对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合→洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA复合物→解交联→纯化富集的DNA-片断→qPCR分析。在qPCR分析这一块,比较传统的做法是半定量-PCR。但是现在随着荧光定量PCR的普及,使用qPCR更能定量地反映实验结果。
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