cDNA文库构建技术原理

cDNA文库,是指含一种生物体所有基因编码的cDNA分子的克隆群。以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方面具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有的应用价值,是研究工作中常使用到的基因文库。

技术流程

应用领域

  • 功能基因的筛选。

  • 新基因的发现。

  • 生物遗传功能的分析。

  • 生物物种资源的开发与保护。

  • 个体发育、细胞分化、衰老和死亡调控等生命现象的研究。

(0)

相关推荐

  • 酵母双杂交

    折叠 编辑本段 基本思想 酵母双杂交由Fields在1989年提出. 他的产生是基于对真核细胞转录因子特别是酵母转录因子GAL4性质的研究. GAL4包括两个彼此分离的但功能必需的结构域. 位于N端1 ...

  • 文库构建技术原理

    基因文库用途广泛,如用于人类及动植物基因组学研究,基因表达调控研究,分析.分离特定的基因片段等.文库已经越来越多地应用于研究领域,如高通量药物靶点筛选,蛋白质工程定向进化,基因疫苗.抗体改造,生物遗传 ...

  • gRNA文库构建技术原理

    CRlSPR/Cas9技术是基因编辑历史上的又一里程碑.该技术通过gRNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰.gRNA文库是药物筛选或靶向筛选特定通路的理想工具,gRNA文库的建立将在功能基 ...

  • 基因突变体文库构建技术原理

    分子定向进化模拟自然选择过程,改变原有蛋白的氨基酸序列,以期获得具有功能的突变蛋白.基因突变文库是DNA变体序列的组合,是基因合成.基因突变和定向进化研究相结合的产物.基因突变文库已经越来越多地应用于 ...

  • shRNA慢病毒文库构建技术原理

    慢病毒shRNA文库介导的基因筛选常规流程如下图1所示.首先,利用慢病毒shRNA文库转导靶细胞,并通过慢病毒载体上携带的筛选标记(例如药物选择或荧光标记)来筛选成功转导的阳性细胞.将阳性细胞分为对照 ...

  • 点突变细胞株构建技术原理

    通过sgRNA引导Cas9核酸酶切割基因组目的序列导致DNA双链断裂(Double-strand breaks, DSB),同时以包含点突变的同源序列为模版,通过同源重组修复(Homology dir ...

  • 慢病毒构建技术原理

    慢病毒载体可以将外源基因或shRNA有效整合到宿主染色体上,从而达到持久表达目的序列的效果.慢病毒除了对肿瘤细胞.肝细胞.内皮细胞等具有很高的感染效率外,对于一些较难转染的细胞如神经元.干细胞等,也具 ...

  • CRISPR/Cas9载体设计与构建技术原理

    CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) /Cas (CRISPR-associated) 是最近几年出现的 ...

  • 环状RNA病毒载体构建技术原理

    circRNAs(Circular RNAs,环形RNA分子)是一类不具有5' 末端帽子和3' 末端poly(A)尾巴.并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子.circRNA是区别于传统线性RNA的 ...

  • miRNA、lncRNA 敲除细胞系构建技术原理

    基因敲除敲入技术一直是研究特定基因功能的有效工具.近10年来,mRNA在医学应用领域取得显著进展.研究人员可快速合成任意序列的mRNA片段,并能保存在室温条件下.在无细胞的体系中利用DNA转录生成ca ...