牛视网膜血管内皮细胞分离培养方法

（1）取成牛眼球，75%酒精消毒，取出周围多余组织，用PBS洗3次，用PBS流水冲洗眼球3次。

（2）沿角膜缘剪开眼球，弃掉角膜、晶体、玻璃体等部分，将眼球后半部翻转取出视网膜，将其剪碎平皿内加入适量0.25%的胰酶，在37℃培养箱中，采用分次消化，每次消化20min约8次。

（3）每次消化后取上清液，并加入等量的含10%的DMEM培养基，轻轻混匀，中和胰酶的消化，防止消化过度。用200目细胞过滤筛子过滤含细胞的混合液，最后将过滤后的细胞悬液1000rpm离心5min。离心后收集沉淀，用PBS再次重复离心3次。用细胞培养基将细胞沉淀重悬，接种于细胞培养瓶中培养，并每日观察细胞的生长，接种后约4d后有少量细胞贴壁。