移液器作为“定量担当”,你会正确使用吗?
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相信小伙伴们每天都在和移液器打交道,移液是实验室中最常见不过的操作。但不论是从事科学研究的学术实验室,还是测试实验室,数据的生成很大程度上受到移液器性能以及使用者操作技术的影响。
当移液数据出现问题时,我们总会怀疑移液器的性能,但是科学文献表明,移液技术对实验的成败也起到关键作用。忽视技术指导可能会造成时间上和金钱上的巨大损失。
测试了来自 7 个动物检疫所的 33 名参与者进行移液器操作培训前后的误差对比。结果显示,简单的移液操作培训即可提高移液的准确性。
那么,问题来了
良好的移液技术应该包括哪些方面?
接下来,我们就从使用最常见的移液器移液的 5 个步骤以及如何准确的实施这些步骤来说明。
最佳量程选择与量程设定
① 移液范围选择在满量程的 35% 到 100% 时,可以保证最佳的准确性和重复性。选择合适的量程可以提高 1% 移液精度!尽量避免将移液器量程设置为最大值的 10% 以下。
② 设定齿轮控制的移液器量程时,始终保持「下调」到所需量程,当由小量程调节到大量程时,旋转调节旋钮到达超过所需量程 1/3 圈处,然后回调到所需量程准确位置,这样能够减少机械回冲或者齿轮滑动带来的影响。
浸入的深度和角度
① 将吸头浸入合适的深度可以提高 5% 的准确性。吸头浸入太深会导致吸液偏多,相反,浸入太浅,会吸入空气。
各种型号规格的移液器推荐的吸头浸入深度如下所示:
规格 |
浸入深度 |
2~10 μL |
1~2 mm |
20~200 μL |
2~3 mm |
200~2,000 μL |
3~6 mm |
2,000 μL 以上 |
6~10 mm |
② 手持移液器的角度也会影响准确性。保证吸液或排液时偏离垂直不超过 20°,可以提高 2.5% 的准确性。
润洗
润洗是一种快速,简单的提升移液准确性高达 0.2% 的方法。 为什么呢?因为液体可能会在吸头内壁上残留形成液体薄膜,这样所得的错误值将小于理论值。想要获得更好的移液精度,可以在安装新吸头后, 用相同样品对吸头进行 2~3 次润洗,这样薄膜会保持相当的恒定,从而提高移液的准确性和重复性。
吸液
保证吸液的一致性可以提高 5% 的准确性。移取不同样品时,使用一致的移液节奏,按压或释放按钮的速度平稳一致,到达第一停止点的用力应保持一致。快速或不平稳的吸液会使液体喷溅、产生气雾、套柄污染以及样品量损失。
分液
良好的分液技巧也能提高 1% 的准确性。分液时用吸头接触容器壁时可以获得更好的一致性。将吸头的孔口端沿着容器壁向上滑动可以去除孔口端残留的液体。另外两种技巧同样非常适用于水溶(非粘性)液。