苏木精伊红染色法
苏木精伊红染色法（Hematoxylin-Eosin Stainning)
一、石蜡切片苏木精伊红染色法
含锇酸或重铬酸钾固定的组织，染色不够鲜艳，细胞质往往呈淡棕红色，可用Cowdry法漂白：切片入1%高锰酸钾水溶液30秒，移入5%草酸水溶液30秒，蒸馏水洗，然后染色。
用Heidenhain Susa混合液固定的组织，效果优于固定液
方法：
⑴新鲜组织固定于甲醛、酒精、Bouin液、Zenker液、Helly液、Susa液或其它固定液固定。
含骨及牙的组织，固定后经5%硝酸或三氯醋酸水溶液及10~15%EDTA水溶液（PBS）脱钙至用针刺能顺利刺入为止；修成适当的形状
⑵常规脱水、透明、浸蜡，包埋，切片5~10微米。
脱钙骨组织脱水、透明（时间15~20分钟）及包埋，切片10~20微米
肝、淋巴结、脾等结缔组织较少的器官，酒精内脱水时间较短；疏松结缔组织较多的组织如皮肤，酒精脱水时间稍长，于95%酒精内将脂肪脱尽
⑶切片贴片、烘干（70℃1~2小时，37℃12~24小时）。
⑷切片经两次二甲苯脱蜡。
骨切片改用松节油两次脱蜡，经无水酒精后入1%火棉胶液处理（防脱片），经无水酒精至蒸馏水洗
⑸经两次无水酒精将二甲苯洗去。
⑹速经95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精至蒸馏水。
含汞固定液如Helly液、Zenker液等，至70%酒精时加少许碘酒脱汞至浅棕色为止，再经5%硫代硫酸钠水溶液去碘，水洗后染色。
⑺蒸馏水洗去酒精。
⑻苏木精液染细胞核5~10分钟，自来水洗去多余染料。
一般用Delafiled苏木精或Harris苏木精或Ehrlich苏木精。
Harris苏木精对软骨基质不易着色。
气管、喉、骨发生最好用Hansen苏木精。
骨组织经1%硫酸钠水溶液洗后用特殊苏木精染色8~17分钟，水洗。不用分色。
甲醛长期固定的组织，细胞核着色困难，需经自来水充分冲洗，再用碳酸锂饱和水溶液中和10分钟或更久，然后染色。
如用Susa液、甲醛酒精混合液或Bouin液固定，苏木精染色较好。
各种组织的着色不同。
⑼用盐酸酒精（70%酒精 100毫升加盐酸0.5~1 毫升）分色数秒至十秒，将多余的苏木精脱去。
⑽快速用70%酒精洗涤后入氨酒精（70%酒精100毫升加氨水0.5~1毫升）返蓝，或经自来水洗至蓝色。
⑾快速经80%酒精、90%酒精和95%酒精洗去氨水并脱水。
⑿入0.5~1%伊红（95%）酒精液染数秒至数分钟。(伊红水溶液染色经水洗并在低浓度酒精内容易褪色）
⒀95%酒精 分色两次数秒至1~2分钟。视组织而定。淋巴结等组织较多的组织，伊红染色时间长，分色稍短。
⒁无水酒精脱水两次各1分钟。
⒂二甲苯透明2~3次各2分钟。
⒃将切片从染色缸内取出，用布擦干切片四周的液体，滴加中性树胶。
⒄轻轻用尖镊子挟取比组织略大的盖玻片，以一角接触树胶，缓慢压下，用镊子秃端轻压（排出切片上的气泡）。擦干盖玻片四周的树胶。放在切片板或晾片板上，置37℃温箱烤24小时以上。
结果：细胞核蓝至深蓝色，细胞质、胶原纤维、肌纤维、嗜酸性颗粒淡粉红色或淡红色。红蓝对比鲜明。
若苏木精染色过深，分色不足，细胞质和纤维略带蓝色；苏木精染色过淡，细胞核带红色。对比不鲜明。
二、冰冻切片苏木精-伊红染色法
LEICA1900冰冻切片机部分故障及处理
| 切片拖尾 | 标本不够冷 | 选择较低的温度 |
| 防倾板不够冷 | 等到切片或防倾板达到冷冻箱的温度 | |
| 切片碎裂 | 标本过冷 | 选择较高的温度 |
| 切片未铺平 | 标本不够冷 | 选择较低的温度 |
| 标本太大 | 平行修整标本，增加切片厚度 | |
| 防倾板位置不佳 | 重放防倾板 | |
| 角度不对 | 设置正确的 角度 | |
| 防倾板与刀刃缘未直 | 校直 | |
| 刀刃不快 | 使用不同位置的刀片或换刀片 | |
| 刀片或防倾板上有污垢 | 用干布或刷子清洗 | |
| 防倾板顶缘损坏 | 换防倾板 | |
| 切片卷曲在防倾板上 | 防倾板未能伸出刀片刃缘足够远 | 重新调节防倾板 |
| 切片时和标本篱运动时有刮擦音 | 防倾板伸出刀片刃缘过远擦到标本 | 重新放防顷板 |
| 切片皱褶 | 刀片损坏 | 换刀片或移动刀片的不同 部位 |
| 防倾板边缘损坏 | 换防倾板 | |
| 切片厚薄不均 | 温度不合适 | 选择正确的温度 |
| 刀片剖面不合适 | 使用不同剖面的刀片（C、D型） | |
| 刀背有冰形成 | 将冰清除 | |
| 手轮速度不一 | 调节手轮速度 | |
| 刀片固定不紧 | 固定刀片 | |
| 标本盘固定不紧 | 重新固定标本盘 | |
| 标本结冰后与标本盘脱离 | 安放标本并冷冻 | |
| 切片厚度不当 | 重设切片厚度 | |
| 角度不够 | 重设角度 | |
| 切片机重装前未适当干燥 | 完全干燥切片机 | |
| 标本干燥 | 重制标本 | |
| 组织粘附或破碎在在防倾板上 | 防倾板太暖或位置不当 | 冷却防倾板或重放防倾板 |
| 防倾板角落或边缘有脂肪 | 从防倾板上除去脂肪 | |
| 防倾板安装不对 | 重装防倾板 | |
| 刀片生锈 | 除锈或换刀片 | |
| 防倾板抬起时铺平的切片卷曲 | 孜倾板太暖 | 冷却防倾板 |
| 切片撕裂 | 切片组织温度过低 | 升高温度并等待到设置的温度 |
| 刀片钝、污垢、灰尘、霜冻或生锈 | 去除原因 | |
| 防倾板顶绷损坏 | 换防倾板 | |
| 组织内有硬颗粒 | ||
| 刀背有污垢 | 清洁刀背 | |
切片组织参考温度（℃）
| -10~-15 | -10~-25 | -15~-25 | -25~-50 |
| 脑 | 肾上腺 | 子宫颈 | 乳腺（带脂肪） |
| 刮宫物 | 软骨 | 乳腺（脂肪较少） | 脂肪 |
| 唇 | 心脏 | 皮肤带有脂肪 | |
| 脾脏 | 血管 | ||
| 血性组织 | 小肠 | ||
| 睾丸 | 肾脏 | ||
| 喉 | |||
| 肺 | |||
| 淋巴 | |||
| 肌肉 | |||
| 鼻 | |||
| 胰腺 | |||
| 前列腺 | |||
| 卵巢 | |||
| 直肠 | |||
| 皮肤不带脂肪 | |||
| 甲状腺 |
方法
⑴火棉胶切片经水洗后直接染色。用玻玻皿作游离染色。
⑵直径10~15厘米的大培养皿加各种试剂。
⑶苏木精染色10~20分钟，水洗。
⑷盐酸酒精分色，水至直蓝色（可加少量碳酸锂饷液或氨水）
⑸伊红水溶液染色1~5分钟，水洗。
⑹逐级经70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水，二甲苯 透明，中性树胶封片。
结果：同上
三、火棉胶切片苏木精-伊红染色法
⑴火棉胶切片（脱水、透明、浸胶、包埋、硬化、切片）保存于70%酒精
⑵火棉胶切片从70%酒精内取出，蒸馏水洗两 次。
⑶苏木精染色，水洗。
⑷伊红染色，水洗。
⑸经各级酒精脱水至95%酒精。
⑹入石炭酸二甲苯脱水透明。
⑺入纯二甲苯两次并洗去残余的石炭酸。
⑻取于载玻片，滴加树胶，加盖玻片封片。
结果：同上。
四、细胞爬片苏木精伊红染色法
⑴对于贴壁生长的细胞，以胰蛋白酶消化，调整细胞浓度约1×105个/毫升，滴加于盖玻片上，置于六孔板中，培养适当时间，取出细胞爬片，用PBS洗涤3次。
⑵95%酒精固定20分钟，PBS洗涤2次，每次1分钟。
⑶苏木精液染核2~3分钟，自来水洗。
苏木精液：铵明矾溶于蒸馏水70毫升，加苏木精0.5克，加碘酸钠1克，蒸馏水5毫升，加甘油30毫升和冰醋酸2毫升，混匀，过滤备用。
⑷镜检，如细胞核染得过深，用0.5~1%盐酸酒精分色数秒，自来水洗。
⑸入0.5~!%伊红水溶液染1分钟，自来水洗。
⑹吸干或自然晾干。
⑺中性树胶封片。
*若细胞用4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木精染色12-15分钟，伊红5分钟即可。