PCR实验室污染？别急，教你如何避免

PCR检测因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用，不过正是由于它灵敏度极高，极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性，因此，如何避免以及处理实验室污染，对PCR人来说是一门必修课。

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实验室污染分类

样本间交叉污染

主要是在采（取）样的过程中，由于取样工具之间的交叉造成污染；或者在核酸提取的过程中，由于移液器、离心管等使用不当导致的污染。 

PCR试剂的污染

主要是在PCR试剂配制过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。

克隆质粒的污染

在实验室操作中经常会用到阳性参考品，这些阳性参考品大多数是由某些克隆质粒制作而成，克隆质粒在单位容积内浓度高，不小心使用极易造成污染。

PCR扩增产物污染

这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳性结果。还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染，在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，据计算一个气溶胶颗粒可含4.8万拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。

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消除污染的操作步骤

1.物料准备

（1）购买喷壶（能够喷出雾状水汽的即可）；

（2）购买市面上有效氯消毒片，根据要求配制不同浓度的消毒液，或者购买成品次氯酸钠消毒液配制合适浓度消毒水；

（3）购买核酸气溶胶污染清除剂（DNA AWAY®原液/MediClean®稀释100倍）；

（4）无纺布/无尘纸等。

2.处理方法

（1）清理废液缸并且对废液缸用有效氯含量为2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染；

（2）用有效氯含量为2000mg/L消毒水对移液枪进行擦洗，关键部位为移液枪前端易污染部位，清洁干净后用洁净水再擦拭一遍；

（3）将离心管架、扩增管架、扩增管架底板、吸嘴盒及其他相关物品用有效氯含量为500mg/L的消毒水浸泡2小时后，用清水冲洗干净晾干后使用；

（4）对污染区域内的设备如扩增仪、全自动提取仪等，使用核酸气溶胶污染清除剂进行反复处理；对生物安全柜等含有空气过滤系统的设备，需更换过滤网；

（5）用有效氯含量为500mg/L的消毒液对整个实验室（地板、墙面、天花板、门、窗户等地方）进行清洁，并且用用有效氯含量为1000mg/L的消毒水对实验室进行喷雾消毒(重点部位为操作区)，有效降解空气中的气溶胶与附着在实验台表面的核酸污染；同时加大通风量（内循环无用，尽可能外循环）；

（6）待污染区域及设备器件清理完成后，常用设备和操作台面使用移动紫外消毒车近距离辐照1小时；实验室内则使用室内紫外灯整晚辐照。

步骤（1）-（6）必须坚持每天进行，确保消除实验室污染；

3.污染消除判断标准

设计阴性对照组，根据阴性对照确认污染情况。可使用敞开后隔夜放置操作区的阴性对照进行实验（在单独的实验室验证），若连续三天阴性对照没有起跳，则说明污染得到控制，可恢复正常实验。

当然，为最大程度的降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现，在实验室前期设计及日常实验室管理和操作中，就需要进行合理的规划以及严格执行实验室SOP，把污染的可能性扼杀在摇篮中。

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