MSI 检测规范，最新共识指南一文讲清！
微卫星 (Microsatellite) 是遍布于人类基因组中的短串联重复序列。机体在正常状态下，微卫星的长度和排序保持不变，并且稳定遗传，而肿瘤组织的微卫星由于重复单位的插入或缺失，导致微卫星长度的改变引起一系列现象称为微卫星不稳定性（Microsatellite Instability, MSI）。
根据微卫星状态可分为：高度微卫星不稳定（MSI-H）、低度微卫星不稳定（MSI-L）、微卫星稳定（MSS）。
对于不同肿瘤，其存在 MSI-H 的比率是不同的，具体比例如下图所示：
图片来自 Bonneville R.et al.,JCO Precis Oncol，2017[3]
（注：UCEC，子宫体子宫内膜癌；COAD，结肠腺癌；STAD，胃腺癌；READ，直肠腺癌；ACC，肾上腺皮质癌；UCS，子宫癌肉瘤；CESC，宫颈鳞状细胞癌和宫颈腺癌；WT，维尔姆斯肿瘤；MESO，间皮瘤；ESCA，食管癌；BRCA，乳腺癌；KIRC，肾透明细胞癌；OV，卵巢浆液性囊腺癌；CHOL，胆管癌；THYM，胸腺瘤；LIHC，肝细胞癌；HNSC，头颈部鳞状细胞癌；SARC，肉瘤；SKCM，皮肤黑色素瘤；LUSC，肺鳞状细胞癌 ；PRAD，前列腺腺癌；LUAD，肺腺癌；BLCA，膀胱癌；NBL，小儿神经母细胞瘤；LGG，低级别胶质瘤；CLL，慢性淋巴细胞白血病 ；GBM，多形性胶质母细胞瘤；AML，小儿急性髓系白血病（TARGET）；CTCL，皮肤 T 细胞淋巴瘤；DLBC，弥漫性大 B 细胞淋巴瘤；KICH，肾嫌色；KIRP，肾肾乳头状细胞癌；LAML，急性髓系白血病（TCGA）；NPC，鼻咽癌；PAAD，胰腺癌；PCPG，嗜铬细胞瘤和副神经节瘤；TCGT，睾丸生殖细胞肿瘤；THCA，甲状腺癌；UVM，葡萄膜黑色素瘤）
目前 MSI 检测位点只有两种选择：
（1）美国国家癌症研究所（NCI）的 2B3D Panel，包含了 BAT-25、BAT-26、D5S346、D17S250、D2S123。
（2）Promega 的 5 个单核苷酸 Panel，包含了 BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO-27。
「2B3D NCI Panel」在国内外都是最权威的检测标准。关于基于中国人群的多中心研究显示 [1，2]，「2B3D NCI Panel」敏感度高于单核苷酸 Promega Panel，提示「2B3D NCI Panel」更适合中国肿瘤患者。
免疫组化法（IHC）
样本要求：肿瘤组织。
检测对象：MMR 蛋白。大量研究表明，MSI 是由错配修复（Mismatch repair，MMR）基因发生缺陷引起的，MMR 蛋白包括 MLH1、MSH2、 MSH6 及 PMS2。IHC 主要检测的也就是以上这 4 种 MMR 蛋白。一般情况下，MSI 与 MMR 的检测结果是一致的。
结果解读：若 4 个 MMR 蛋白均表达，则为 pMMR = MSI-L/MSS ，若任一蛋白缺失，则为 dMMR = MSI-H 。
优点：价廉、耗时少，在国内的医疗单位中普及性强。
缺点：首先 IHC 判读 dMMR 对病理医师要求较高，检测结果容易受判读人员的主观因素影响，存在一定概率的假阴性和假阳性；其次仅凭这 4 种 MMR 蛋白的 IHC 分析判断 MSI 状态可能出现漏诊。
基因测序（NGS）
样本要求：肿瘤组织或血液。
对象：DNA。
结果解读：可同时提供 MSI 位点、MMR 基因状态及其他分子标志物信息，由于数据复杂，目前缺乏统一的评判标准。
优点：通量大，提供更多分子信息，与 PCR 方法比较，具有更高的敏感性和特异性。
缺点：价格昂贵，数据复杂，结果解读尚缺乏统一标准。
多重荧光 PCR
样本要求：肿瘤组织+癌旁组织。
对象：DNA。
结果解读：「2B3D 或 Promega」：≥ 2 个 MS 位点不稳定，则为 MSI-H；1 个 MS 位点出现不稳定，则为 MSI-L；若 5 个 MS 位点均稳定，则为 MSS。
优点：是目前公认的检测 MSI 的金标准，准确性及标准化高。
缺点：无法直接判断功能异常的蛋白。
2021 年更新的 NCCN 指南将推荐 MSI 检测的适应症癌种从结肠癌、直肠癌、胃癌、子宫内膜癌扩大到了前列腺癌、胰腺癌等多个实体瘤。结直肠癌、胃癌、子宫内膜癌、小肠腺癌、胰腺癌这 5 个临床常见癌种 MSI 的发生率非常高。
Lynch 综合征的筛查
Lynch 综合征是发病率最高的遗传性肿瘤综合征之一，Lynch 综合征患者罹患恶性肿瘤的累积风险是普通人群的数十倍。
胃肠肿瘤判断预后及化疗药物疗效预测
目前有大量证据表明，MSI-H 是 II 期肠癌患者预后良好的一个标志物，且无法从 5-FU 单药化疗中获益。同样有研究表明，与 MSS 患者相比，MSI-H 的胃癌、小肠腺癌患者预后更好。
预测免疫疗效
MSI-H 对免疫疗法更加敏感，更能从免疫治疗药物获益；MSI-L 及 MSS 对免疫疗法不敏感，不太可能获益。
综上所述，MSI 是多种实体瘤或相关疾病的重要标志物，受到越来越多权威指南的重视及推荐，尤其在胃肠肿瘤中成为必须检测和常规检测，在肿瘤筛查、化疗、免疫治疗及预后评估等方面具有举足轻重的地位。「2B3D NCI Panel」是国内外最常规推荐的位点选择，试剂选择优先选择获得 NMPA 批准的 MSI 检测试剂盒。
策划：GoEun，梅浙