细胞学堂 | RAW264.7分化问题全攻略 / 开普饭

养过RAW 264.7的小伙伴，

都容易为一个问题感到苦恼：

它太容易分化了！

到底怎样才能养好它呢？

小普今天就给大家分享一些心得。

养好RAW 264.7之基础篇

养好RAW 264.7的第一步，是要对它的基础培养条件了如指掌，比如生长特性、细胞形态、所需的培养基，甚至培养环境、传代比例等等，做到知己知彼，才能百战百胜。

细胞名称	RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
细胞别称	RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7
种属	小鼠（雄性，成年BALB/c鼠）
组织来源	Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤
生长特性	贴壁细胞
细胞形态	不规则形（圆形、短梭形）
生长培养基	DMEM＋10% FBS＋1% P/S
培养环境	气相：95%空气；5%CO2 温度：37℃
推荐传代比例	1:3 - 1:6
冻存液配方	55% DMEM 40% FBS 5% DMSO

▲RAW 264.7生长图片

养好RAW 264.7之进阶篇1

除了基础条件，其他外界因素也容易引起细胞的“小脾气”，比如运输路上的颠簸、传代方法等等。针对几种常见的问题，小普来一一为大家解答。

问题1 ：收货后，细胞不见了

小普总是会收到这类反馈：收到细胞，期待值满满地打开包装，但在显微镜下却找不到细胞！

这是因为RAW 264.7 细胞贴壁较松，快递运输路上受到颠簸，可能会脱落。脱落的细胞悬浮在培养基中不容易聚焦。

这时候不用担心，把细胞放进培养箱静置两个小时就可以看到了。

如果静置后看到的细胞仍偏少，请将瓶子里的培养基都转移到离心管里，1200rpm（约250g）离心3分钟，即可看到沉淀的细胞。

细胞全部脱落，慌乱之下可能会一个细胞都找不着。这个时候离心验证是最好的方法。

问题2 ：收货处理后，细胞不贴壁

将细胞离心收集，用新鲜的培养基重悬细胞放到新的培养瓶里之后，可能会出现细胞成团漂浮、不贴壁的情况。

这种情况下，把细胞离心收集，用1mL培养基重悬，慢慢地，轻轻地吹打，直到细胞被吹成单细胞，就可以重新铺板了。

RAW 264.7脱落后倾向于抱团，抱团时细胞是活着的，但很难贴壁。记得一定要把聚成团的细胞吹散成单细胞，不然细胞很难重新贴壁。

养好RAW 264.7之进阶篇2

正确的传代方法是养好RAW 264.7的关键，每一步操作都要细致入微，稍有不慎细胞就分化了。

RAW 264.7不能用胰酶消化，许多实验室用细胞刮传代，这是一种非常经典好用的方法。

小普在养RAW 264.7细胞这十几年里，摸索出一个更不错的方法：吹打传代。

吹打传代操作简单，对养细胞的萌新们更友好，也能更好地控制细胞分化率。

吹打传代步骤

轻拍几下培养皿

用1ml 的枪或者巴氏管把细胞吹下来（吹不下来的舍弃）

细胞吹下来后转移到15ml离心管

1200rpm(约250g) 离心3min

去上清，用新鲜培养基重悬细胞

按比例接种到新的培养皿中

吹打传代时机

吹打传代时机

当细胞密度较低的时候，可能不太好吹下来。

当细胞密度达到80%~90%的时候，最容易吹下。

▲推荐传代的密度

养好RAW 264.7之终结篇

讲了那么多如何处理RAW 264.7分化的情况，那分化了的细胞到底是什么形态呢？

分化的RA264.7

分化的细胞呈多角形，体积明显增大，时常有较长的黑色触角。

注意事项

RAW 264.7细胞三天不传代更容易分化，很难吹下，每一次接种密度都要控制好；

分化的细胞贴壁牢固，传代的时候请勿强制性吹下这些细胞，只接种容易吹下的那些未分化细胞；

吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打；

细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关，有时RAW 264.7 会出现太容易吹下的情况，连分化细胞都贴壁较松，此时更适宜用巴氏管吹打；

培养时，无法保证100% 不分化，通过传代可以将分化比例控制在一定范围；

RAW 264.7分裂活跃，记得每天看一看，周末也要抽点时间关心一下它哦~

养细胞不易，每个细胞对我们而言，都像是宝宝，含在嘴里怕化了，捧在手里怕摔了。

正是因为对科研的无畏坚持，让我们更有力量接受考验，因为科研本身，值得敬畏和付出。

RAW 264.7的起源

加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）诱发肿瘤的腹水中建立了RAW 264细胞系。

他发现RAW 264可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖，并且能通过抗体依赖途径分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。

RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清检测到病毒），对LPS非常敏感。该研究1978年发表在《CELL》杂志。

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参考资料

[1] https://www.atcc.org/products/tib-71

[2] Raschke WC, Baird S, Ralph P, Nakoinz I. Functional macrophage cell lines transformed by Abelson leukemia virus. Cell. 1978 Sep;15(1):261-7. doi: 10.1016/0092-8674(78)90101-0. PMID: 212198.

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