DAB染色液（二氨基联苯胺法） / 开普饭

DAB染色液运用还原态无色亚甲蓝则在病变细胞内 Fe2+强烈催化下，迅速被细胞内广泛存在的活性氧氧化，变为有色的氧化态亚甲基蓝。

【原理】细胞颗粒中的过氧化物酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺，形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。

DAB染色液用途:用于免疫组化染色，应用在Dako 自动染色系统上。

【主要组成成分】由亚甲蓝、叶酸衍生物、冰醋酸等组成，呈淡黄棕色。

【DAB染色液的使用方法】

使用前先用蒸馏水将B显色液（1:25）稀释为工作液，然后按比例（1:25）加入A显色液，混匀后立即使用。

显色时间1-30分钟，显色时间过长可引起本底增高，故应密切观察显色过程（一般3-10分钟最理想），并在本底较浅且达到适当显色强度时以流水漂洗终止显色反应。

1.DAB显色液配制

10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3，3-二氨基联苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,显色时加入5-10mL 30%H2O2 混匀后立即使用

2. 显色

准备好含有待测蛋白的固相膜：包括电泳、转印、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处理、清洗等步骤。

3.加入适量的DAB显色液，铺满整个固相膜表面（可按比例增减）。

4. 置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分钟，避免光照（暗室操作），直至棕褐色沉淀出现。

5.用镊子夹起固相膜，放进无离子水里清洗。

6.空气中晾干。

7. 做好记录。

DAB染色液的注意事项

1． DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用；

2．显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用；

3． DAB在常温下不稳定，每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱，以免因DAB分解影响实验，或因渗漏造成实验环境污染；

4． DAB有潜在致突变作用，操作时应注意穿戴好防护用具。

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DAB染色液（二氨基联苯胺法）