衰老研究的十大标志物，你不知道？

提到细胞衰老的研究，你能一口气说出几个标志物？

了解细胞周期停滞发生的时间和原因对发育、衰老、癌症等许多研究领域都至关重要。当然科研工具越好，产生的结果就越好，因此，对于衰老研究，确保您有“衰老研究的十大靶标”的研究工具。

1

β-Galactosidase Staining Kit

衰老细胞是以 pH 依赖的方式表达 β 半乳糖苷酶，特别是在 pH 值为 6 时是可检测到的 (1)。这种便捷的染色试剂盒含有所有用于细胞或甚至是冷冻组织中检测 pH 值为 6 时的 β 半乳糖苷酶活性所需的东西！它非常适合快速便捷地检测多个细胞群或组织样品，方向简单明了，并且蓝色染色明亮清晰。

pH 值 为 6 时，对细胞群倍增数为 29（左图）的正常 WI38 细胞以及细胞群倍增数为 36（右图）的衰老 WI38 细胞进行 β-半乳糖苷酶染色。

近期，CST还推出了基于流式和ELISA 原理的 β 半乳糖苷酶的检测试剂盒：（详细介绍请关注下期微信推文）

2

p53 和 磷酸化p53

p53 研究很广泛，几乎不需要介绍了！作为 DNA 损伤应答 (DDR) 通路的主要参与者，p53 还是细胞周期的关键调节分子，其中增加的磷酸化 p53 将会激活周期素依赖性激酶抑制剂 (CDKI)，并最终导致细胞周期停滞。

使用 p53 (7F5) Rabbit mAb（绿色） 对 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。

正如上面所述的，衰老细胞周期停滞高度依赖于phospho-53，而phospho-53 会聚集并激活多种不同的 CDKI。在 p53 和phospho-p53 水平之间进行比较分析通常是研究 DDR 通路和衰老的一个关键步骤。

使用 Phospho-p53 (Ser46) Antibody (绿色) 对未经处理 (左图) 或 Etoposide (右图) 处理的 MCF-7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。

3

p21

其中一个确立已久的衰老标志物 p21 是磷酸化-p53 的下游 CDKI。p21 通过在结合 CDK2 时阻断细胞周期进入 G1/S 来起到细胞周期抑制剂的作用 (1)。

使用 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb（红色）和 Phospho-Histone H3 (Ser10) (6G3) Mouse mAb #9706（绿色）对 MCF7 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。

4

p16

另一种常见且可靠的衰老标志物 p16 的表达被认为会促使细胞衰老 (2)。p16 是 CDKI INK4 家族的成员，它会与 CDK4 和 CDK6 作用使细胞周期停滞在 G1 (3)。

使用 p16 INK4A (D3W8G) Rabbit mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 （下图）对 HeLa 和 HUVEC 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。

5

LaminB1

衰老细胞通常显示出形态变化，使得 LaminB1 成为另一个有用的衰老指示分子。胞核形态标志物 LaminB1 在衰老的人和小鼠细胞中出现表达缺失 (4)。LaminB1 缺失以及 p21 和 p16 聚集的增加均是重要典型的衰老标志。

使用 Lamin B1 (119D5-F1) Mouse mAb（绿色）和 β-Actin (13E5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #8584（红色）对 HT-29 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution #4087（DNA 荧光染料）。

6

衰老相关分泌表型 (SASP)

衰老细胞有许多常见特征，但这些特征不尽相同。每个衰老细胞群表现为细胞因子、生长因子和蛋白酶水平不同，这称为衰老相关分泌表型 (SASP)。SASP Antibody Sampler Kit 含有针对各种蛋白的抗体，可用于研究衰老细胞。这个系列可以让您确定您的细胞群的特定 SASP。

使用 IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb 对重组 Human Interleukin-1β (hIL-1β) #8900 进行蛋白印迹分析。

7

Rb 和 磷酸化 Rb

通常，Rb 磷酸化是解除转录靶标抑制并推进细胞周期进程所必需的。各种 CDKI（包括 p21 和 p16）对细胞周期的抑制会导致 Rb 被过度激活；这最终会导致细胞周期停滞和衰老 (4)。

使用 Rb (4H1) Mouse mAb（绿色）对 SH-SY5Y 细胞进行共聚焦免疫荧光图像分析。肌动蛋白丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin（红色）标记。

Rb 必须经过磷酸化才能推进细胞周期进程，因此在衰老细胞中未见磷酸化-Rb。与 p53 一样，在研究衰老时，对 Rb 和磷酸化 Rb 进行比较分析是最重要的。

使用 Phospho-Rb (Ser807/Ser811) (D20B12) XP® Rabbit mAb（绿色）对未经（上图）或已经 λ 磷酸酶（下图）处理的 MCF7（左图）和 BT-549（右图）细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ® #4084（DNA 荧光染料）。

8

γ-H2A.X

γ-H2A.X 是 DDR 通路的一种典型标志物。DNA 损伤会导致快速可靠的应答，其中 H2A.X 在 Ser139 上被磷酸化，形成 γ H2A.X (5)，使其成为一种研究 DDR 通路和衰老的强大工具。

使用 Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb 对未经处理的（左）或经紫外线处理（右）的石蜡包埋的 HT-29 细胞进行免疫组织化学分析。

9

53BP1

53BP1 最初被发现是 p53 的结合伴侣，会增强其转录活性 (6, 7)。53BP1 在 DNA 修复中起到重要作用，已知会被募集到 DNA 损伤位点，53BP1 是否停留在这些位点取决于 γ-H2A.X (8)。

使用 53BP1 Antibody（绿色）对 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 Alexa Fluor® 555 phalloidin（红色）标记。

10

Ki67

有时，检测某种物质的最佳方式是确定未起作用的物质。Ki67 是一种胞核蛋白，它也是一种频繁使用的细胞增殖标志物。这种检测横跨 G1 至有丝分裂结束，但在细胞处于 G0 休止期时无法检测到 (9)。衰老细胞的标志是永久性退出细胞周期，因此衰老细胞不表达 Ki67。

使用 Ki-67 (8D5) Mouse mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。