人源scFV抗体库构建技术服务

噬菌体展示抗体文库被广泛应用于高亲和力抗体的筛选工作，如血管生成标志物纤连蛋白，肿瘤特异性B3/B4抗原，EGFR等蛋白特异性高亲和力抗体的筛选。通过噬菌体展示技术构建的抗体文库通常来源于RT-PCR扩增外周血单核细胞，脾细胞，骨髓细胞和扁桃体来源的mRNAs形成cDNA片段，将这些基因片段拼接到噬粒载体，再转入噬菌体形成共价结构蛋白表达和体外展示。抗体重链和轻链独立自由表达，然后随机地组合，形成噬菌体克隆数达到10¹¹-10¹²的庞大抗体库。

图1 噬菌体展示技术

Single-chain Fv（scFv）抗体文库是指将抗体的可变区（VH和VL）基因，尤其是CDR区域（互补决定区）采用不同的策略和方式，如氨基酸突变，移码读框等形成数目庞大的不同克隆，并从这些克隆中筛选出针对目的抗原的高亲和力单链Fv抗体。研究表明，抗体可变区的CDR3的多样性直接决定了抗原特异性和结合亲和力，并且CDR3-FR（frame region）组合的多样性决定了抗体经历何种方式的亲和成熟过程。

采用错误倾向性PCR，巢式PCR等技术构建达到10⁸-10⁹CFU库容量的一级文库。相比Fab 抗体文库，由于scFv抗体分子量更小，约25kDa，scFV抗体更加稳定，也不容易形成多聚体。