Northern杂交检测样本收集注意事项

1.    新鲜组织:

用解剖刀等迅速切成小碎块,约30-100 mg,放入2.0 mL离心管中,开盖液氮速冻15 min,-80℃保存,干冰运输。

每个northern blot泳道提供2-3管样品。

注:解剖刀处理组织的时间尽量控制在1 min以内。

液氮速冻时必须开盖,以防炸裂。

2.    细胞样品:

悬浮细胞1000-1500 rpm,5 min,常温离心收集细胞。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,吹打收集,PBS洗涤细胞,去除多余培养基和胰蛋白酶。开盖液氮速冻15 min,-80℃保存,干冰运输。

一般情况下,细胞培养的6孔板,每孔细胞数量约为0.5~2×106个。每个离心管中的细胞数量控制在5×106个左右!每个northern blot泳道提供2-3管样品。

3.    RNA样品:

RNA溶液(DEPC-treated water溶解):-80℃保存,干冰运输。

RNA沉淀:保存在75%乙醇(无核酶)中的RNA沉淀,2~8℃保存一周,-20℃保存一年;加冰块低温运输。

质量检测:

取1-2 μL的RNA进行琼脂糖凝胶电泳,5s,18s,28s清晰可见,28s的亮度应为18s的1.5~2倍;无基因组污染。

纯度、浓度检测:

OD260/280=1.9~2.2;浓度≥300 ng/μL。

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