细胞转染技术有哪些类型？

转染的类型根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短，可以分为瞬转和稳转。根据转染方式可以分为化学，生物，物理方法。瞬转：因为导入的核酸没有整合到宿主细胞基因组，因此它只会短暂地存在于宿主细胞中，不会随着细胞的分裂而进入到子代细胞中。然而，导入的遗传物质的高拷贝数导致其在细胞内的蛋白质表达水平较高。根据所使用的载体的不同，瞬转通常可以1至7天内进行基因检测，但是瞬时转染的细胞通常在转染后24-96小时收获。当使用超螺旋质粒DNA时，瞬时转染的效果最好，推测是由于超螺旋质粒DNA能更有效地被细胞摄取。稳转：外源DNA整合到细胞基因组中或作为附加体质粒保留在细胞中。与瞬时转染不同，稳定转染允许外源DNA在转染的细胞及其后代中的长期维持。然而，通常是将单拷贝或几个拷贝的外源DNA整合到稳定转染的细胞的基因组中，因此，其表达水平一般低于瞬时转染的表达水平。由于稳转效率较低，因此选用有效地转染策略和筛选方法很重要。其中比较可靠地筛选方法是在DNA载体中包含选择性标记，然后在细胞转染短暂性恢复后进行适当地选择性加压。尽管相对于超螺旋DNA，线性DNA被细胞摄取的效率较低，但其能最有效地整合到宿主基因组中。目前，由于各种转染试剂的发明，哺乳动物细胞的瞬时转染已经用于生产具有适当折叠和翻译后修饰的重组蛋白。但表达mg/L-g/L的重组蛋白主要依赖于稳定细胞系的产生。瞬转和稳转的比较瞬转稳转导入的DNA没有整合到基因组中，而是保留在细胞核上导入的DNA整合到基因组中导入的遗传物质不传递到子代； 遗传改变只是暂时的导入的遗传物质能够代代相传；遗传改变是永久的不需要选择性筛选需要选择性筛选出稳定转染的细胞DNA载体和RNA都可用于瞬时转染只有DNA载体可用于稳定转染；RNA本身不能稳定地导入细胞中导入的遗传物质的高拷贝数导致高水平的蛋白质表达。单拷贝数或低拷贝数的稳定整合的DNA导致较低水平的蛋白质表达。通常在转染后24-96小时内收获细胞。需要2-3周的时间筛选出稳定转染的细胞克隆。通常不适合使用具有诱导型启动子的载体的研究。适用于使用带有诱导型启动子的载体的研究。