肥大细胞特殊染色
肥大细胞(Mast cell)
来源于未分化的间充质细胞
正常多见于小血管周围,结缔组织中有少量,常见于支气管周围和胰腺的小叶间导管周围,肠系膜小血管周围较多
比一般细胞大(直径20~30微米),圆形或椭圆形,核较小,圆形,胞质充满粗大并具异染性的圆形 嗜碱性颗粒,HE染色呈红色
肥大细胞颗粒含肝素、组织胺、慢反应物质和嗜酸性粒细胞趋化因子等成分,参与过敏反应
取材要组织新鲜,迅速固定,颗粒因存放过久而被破坏
染色方法:
硫堇法、甲苯胺蓝法、苏木精-中性红法、陶利新蓝沙黄法、醛品红-橘黄G法等
硫堇法或甲苯胺蓝法将肥大细胞颗粒染成红紫色,其他组织蓝色
苏木精中性红法将细胞颗粒染成红色
阿利新蓝沙黄法将幼稚型肥大细胞染成蓝色,成熟型肥大细胞颗粒染成红色
醛品红-橘黄G法将肥大细胞颗粒染成深紫色,其他细胞不着色,背景橙黄色,对比清晰
甲苯胺蓝染色法
试剂:
甲苯胺蓝液:甲苯胺蓝(Toluidine blue)0.5克,加蒸馏水至100毫升
0.5%冰醋酸液:冰醋酸(Glagial acetic acid)0.5毫升,蒸馏水99.5毫升
方法:
⑴组织固定于10%甲醛生理盐水或甲醛酒精液,常规脱水包埋切片。
⑵切片常规脱蜡至水。
⑶甲苯胺蓝液染20~30分钟,水速洗。
⑷冰醋酸液分化至细胞核和颗粒清晰,水稍洗,用风扇吹干。
⑸二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:
肥大细胞颗粒红紫色,核蓝色。
染色后用风扇吹干而不用酒精脱水,因酒精容易使肥大细胞颗粒呈蓝色。
硫堇可代替甲苯胺蓝。
醛品红-橙黄G法(改良的Gomori,1950)
试剂:
醛品红液:弹力纤维
橙黄G液:脑垂体
方法:
⑴组织固定于10%甲醛生理盐水溶液,常规脱水包埋切片。
⑵切片脱蜡至80%酒精。
⑶70%酒精稍洗。
⑷入醛品红液染10~15分钟。
⑸70%酒精分色,水速洗。
⑹橙黄G液滴染1秒钟,水速洗。
⑺经各级酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:
肥大细胞颗粒呈紫红色至深紫色;弹性纤维呈深紫色;红细胞鲜橙黄色;其它组织淡黄色。
Gomori醛品红液染弹性纤维和肥大细胞,效果可靠稳定,橙黄G液复染,背景为淡黄色,对比清晰
醛品红液染色胰岛B细胞需30分钟,染脑垂体需1小时,肥大细胞仞需10~15分钟
肥大细胞染色要求组织新鲜,固定声速。
阿利新蓝沙黄法(Csaba,1969)
试剂:
醋酸钠-盐酸缓冲液(pH1.42)
A液(1M醋酸钠):无水醋酸钠(Sodium acetate anhydrous)8.2克或醋酸钠·3H2O 13.6克,加蒸馏水至100毫升
B液(1N盐酸):盐酸(Hydrochloric acid)8.4毫升,加蒸馏水至100毫升
取A液20毫升与B液24毫升混合,加蒸馏水56毫升,其pH1.42。
阿利新蓝沙黄液:阿利新蓝(Alcian blue 8 GX)0.36克,沙黄(Safranin)0.18克,硫酸铁铵(铁明矾Ferric ammonium sulfate)0.48克,醋酸 盐缓冲液(pH1.42)100毫升
方法:
⑴组织固定于10%甲醛生理盐水溶液,常规脱水,包埋,切片。
⑵切片常规脱蜡至水。
⑶阿利新蓝液染色15分钟,自来水速冼。
⑷第三丁醇(叔丁醇Tertiary butyl alcohol)脱水
⑸二甲苯透明,中性树胶封固。
结果:幼稚型肥大细胞颗粒蓝色(生物胺);成熟型肥大细胞颗粒红色(肝素)。