肥大细胞特殊染色

肥大细胞(Mast cell)

来源于未分化的间充质细胞

正常多见于小血管周围,结缔组织中有少量,常见于支气管周围和胰腺的小叶间导管周围,肠系膜小血管周围较多

比一般细胞大(直径20~30微米),圆形或椭圆形,核较小,圆形,胞质充满粗大并具异染性的圆形 嗜碱性颗粒,HE染色呈红色

肥大细胞颗粒含肝素、组织胺、慢反应物质和嗜酸性粒细胞趋化因子等成分,参与过敏反应

取材要组织新鲜,迅速固定,颗粒因存放过久而被破坏

染色方法:

硫堇法、甲苯胺蓝法、苏木精-中性红法、陶利新蓝沙黄法、醛品红-橘黄G法等

硫堇法或甲苯胺蓝法将肥大细胞颗粒染成红紫色,其他组织蓝色

苏木精中性红法将细胞颗粒染成红色

阿利新蓝沙黄法将幼稚型肥大细胞染成蓝色,成熟型肥大细胞颗粒染成红色

醛品红-橘黄G法将肥大细胞颗粒染成深紫色,其他细胞不着色,背景橙黄色,对比清晰

甲苯胺蓝染色法

试剂:

甲苯胺蓝液:甲苯胺蓝(Toluidine blue)0.5克,加蒸馏水至100毫升

0.5%冰醋酸液:冰醋酸(Glagial acetic acid)0.5毫升,蒸馏水99.5毫升

方法:

⑴组织固定于10%甲醛生理盐水或甲醛酒精液,常规脱水包埋切片。

⑵切片常规脱蜡至水。

⑶甲苯胺蓝液染20~30分钟,水速洗。

⑷冰醋酸液分化至细胞核和颗粒清晰,水稍洗,用风扇吹干。

⑸二甲苯透明,中性树胶封固。

结果:

肥大细胞颗粒红紫色,核蓝色。

染色后用风扇吹干而不用酒精脱水,因酒精容易使肥大细胞颗粒呈蓝色。

硫堇可代替甲苯胺蓝。

醛品红-橙黄G法(改良的Gomori,1950)

试剂:

醛品红液:弹力纤维

橙黄G液:脑垂体

方法:

⑴组织固定于10%甲醛生理盐水溶液,常规脱水包埋切片。

⑵切片脱蜡至80%酒精。

⑶70%酒精稍洗。

⑷入醛品红液染10~15分钟。

⑸70%酒精分色,水速洗。

⑹橙黄G液滴染1秒钟,水速洗。

⑺经各级酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

结果:

肥大细胞颗粒呈紫红色至深紫色;弹性纤维呈深紫色;红细胞鲜橙黄色;其它组织淡黄色。

Gomori醛品红液染弹性纤维和肥大细胞,效果可靠稳定,橙黄G液复染,背景为淡黄色,对比清晰

醛品红液染色胰岛B细胞需30分钟,染脑垂体需1小时,肥大细胞仞需10~15分钟

肥大细胞染色要求组织新鲜,固定声速。

阿利新蓝沙黄法(Csaba,1969)

试剂:

醋酸钠-盐酸缓冲液(pH1.42)

A液(1M醋酸钠):无水醋酸钠(Sodium acetate anhydrous)8.2克或醋酸钠·3H2O 13.6克,加蒸馏水至100毫升

B液(1N盐酸):盐酸(Hydrochloric acid)8.4毫升,加蒸馏水至100毫升

取A液20毫升与B液24毫升混合,加蒸馏水56毫升,其pH1.42。

阿利新蓝沙黄液:阿利新蓝(Alcian blue 8 GX)0.36克,沙黄(Safranin)0.18克,硫酸铁铵(铁明矾Ferric ammonium sulfate)0.48克,醋酸    盐缓冲液(pH1.42)100毫升

方法:

⑴组织固定于10%甲醛生理盐水溶液,常规脱水,包埋,切片。

⑵切片常规脱蜡至水。

⑶阿利新蓝液染色15分钟,自来水速冼。

⑷第三丁醇(叔丁醇Tertiary butyl alcohol)脱水

⑸二甲苯透明,中性树胶封固。

结果:幼稚型肥大细胞颗粒蓝色(生物胺);成熟型肥大细胞颗粒红色(肝素)。

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