基因敲入是什么？基因敲入原理介绍

基因敲入是基于基因重组原理，将外源基因插入生命体基因组中，并使其在体内表达的技术。基因敲入一般有两种形式：

① 定点敲入：通过插入特定启动子位点来表达外源基因

在小鼠基因组的安全位点插入一段表达蛋白质所需要的完整DNA序列单元：包含特定启动子，需要过表达基因的CDS区以及polyA结构来实现过表达某种蛋白质。该位点一般能保证插入基因的正常表达，且对小鼠也无副作用。例如ROSA26位点就是一个非常成熟的位点，引物、同源臂的设计都得到验证。

② 原位敲入：在原基因敲除的位点插入新的基因

利用小鼠自身的启动子，在原基因敲除的位点插入新的基因CDS区，一般为引入报告基因以观察启动子表达情况，如GFP。也用于点突变鼠的构建。