生物组织切片标本制作技术Ⅱ 染色方法、封固
九、染色
（二）染色方法
对比染色：用不同染液分别染同一材料的不同部分
全面染色：一种试剂将组织染成同一染色、
选择性染色：用染料另染其中某一部分结构
单染：一种试剂染色。如Delafield苏木精染色法、Heidenhain苏木精染色法有助档、硼砂卡红染色法
复染：两种以上试剂染色，包括双重染色（如苏木精伊红染色法、番红固绿染色法、结晶紫真真曙红染色法）、三重染色（番红结晶紫橙黄G染色法、Mallory酸性品红苯胺蓝橙黄G染色法、铁苏木精、酸性品红、苯胺蓝染色法，番红结晶紫橙黄G染色法、鞣酸三氯化铁番红固绿染色法）、Falg酸性品红亮绿橙黄G染色法）、四重染色等。把不同染液分开染，或用混合液一次性同时完成。
滴染：反染液滴在玻片上染色。时间较短
缸染：把粘有组织的载玻片放在染色缸中浸染。时间较长
1.Delafield苏木精染色
⑴将用二甲苯脱蜡的切片移入无水酒精-二甲苯混合液（1：1）10分钟
⑵无水酒精5~10分钟洗去二甲苯
⑶95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精至50%酒精及蒸馏水各5~10分钟，使组织尽量充满水分。
⑷Delafield苏木精5~10分钟，水洗5~10分钟
⑸盐酸酒精（70%）分色5~10秒。
⑹70%酒精2~3分钟
⑺碱酒精（70%酒精100毫升加氨水0.5毫升）1分钟
⑻80%、90%、95%酒精及无水酒精3~5分钟。
⑼无水酒精-二甲苯（1：1）3~5分钟。
⑽二甲苯透明5分钟。
⑾用树胶封固。
2.Heidenhain苏木精染色法
⑴将用二甲苯脱蜡的切片移入无水酒精-二甲苯混合液（1：1）10分钟
⑵无水酒精5~10分钟洗去二甲苯
⑶95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精、50%酒精、30%酒精、20%酒精各3~5分钟。
⑷蒸馏水洗30~60秒
⑸2.5% 铁明矾水溶液媒染4小时，水洗10~15分钟。
⑹Heidenhain苏木精4~6小时，水洗3~5分钟
⑺2.5%铁明矾水溶液分色，水洗30秒。
⑻30%酒精、50%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精及无水酒精3~5分钟。
⑼无水酒精-二甲苯（1：1）3~5分钟。
⑽二甲苯透明5分钟。
⑾用树胶封固。
3.硼砂卡红染色法
⑴将脱蜡的切片放入二甲苯-无水酒精混合液（1：1）10分钟。
⑵无水酒精5~10分钟。
⑶95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各3 ~5分钟
⑷硼砂卡红液1~24小时（动物材料温染1小时；植物染色时间可达24小时）。盐酸酒精（70%酒精100毫升加盐酸0.25毫升）分色至颜色清晰为止（约1小时）。
⑸70%酒精10~15分钟洗去盐酸，换一次液。
⑹80%酒精、90%酒精、95%酒精、无水酒精各5分钟。
⑺无水酒精-二甲苯（1：1）5分钟。
⑻二甲苯透明5~10分钟。
⑼树胶封固。
4,苏木精伊红染色法
⑴切片脱蜡5~10分钟（冬天35~37℃温箱）
⑵二甲苯-无水酒精等量混合液5~10分钟。
⑶无水酒精3~5分钟。
⑷9%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精、50%酒精、30%酒精各3~分钟。
⑸Hansen苏木精染液5~15分钟，蒸馏水略洗15秒。
⑹1%盐酸酒精（70%）分色20秒，水洗20~30分钟。
⑺0.1~0.5%伊红（曙红）水溶液2~3分钟（可加冰醋酸1~2滴增强染色）。
⑻50%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、无水酒精快速脱水各2~3分钟。
⑼无水酒精二甲苯等量混合液2~3分钟。
⑽二甲苯透明5~10分钟，树胶封固。
5.苏木精-橙黄 G染色法
⑴切片入二甲苯脱蜡5~10分钟。
⑵二甲苯无水酒精等量混合液5~10分钟。
⑶无水酒精3~5分钟。
⑷95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒席、50%酒精、30%酒精各3~5分钟，水洗1分钟。
⑸2.5%铁明矾水溶液媒染小时，水洗10分钟。
⑹Heidenhain苏木精染2小时水洗20~30分钟。
⑺2.5%铁明矾水溶液分色至合适为止，水洗15~20分钟。
⑻橙黄G染液1分钟，水洗5秒。
⑼50%酒精、70%酒精各1分钟。
⑽90%酒精及无水酒精各2分钟。
⑾二甲苯无水酒精等量混合液1分钟。
⑿二甲苯透明5~10分钟。
⒀树胶封固。
6.Heidenhain铁苏木精-番红染色法
⑴二甲苯脱蜡5~10分钟。
⑵二甲苯无水酒精等量混合液5~10分钟。
⑶无水酒精3~5分钟。
⑷95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精、50%酒精、30%酒精各3~5分钟，水洗1分钟。
⑸2.5%铁明矾水溶液媒染3~4小时，水洗 10~15分钟。
⑹Heidenhain苏木精3~4小时。
⑺2.5%铁明矾水溶液分色，水洗1小时。
⑻番红苯胺水溶液12~15小时，水洗5秒。
⑼70%酒精、80%酒精、90%酒精和无水酒精各30秒。
⑽无水酒精二甲苯等量混合液1分钟。
⑾二甲苯透明5~10分钟，树胶封固。
7.Delafield苏木精-番红染色法
⑴二甲苯脱蜡5~10分钟。
⑵二甲苯无水酒精等量混合液5~10分钟。
⑶无水酒精3~5分钟。
⑷95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各3~5分钟。
⑸Delafield苏木精30分钟。
⑹0.2%盐酸酒精（70%）分色3~5秒，水洗1分钟。
⑺50%酒精洗1分钟。
⑻1%番红酒精（50%）溶液12小时。
⑼70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、无水酒精各30秒。
⑽无水酒精二甲苯等量混合液1分钟。
⑾二甲苯透明5~10分钟。
⑿树胶封固。
8.番红固绿染色法
⑴З二甲苯脱蜡5~10分钟。
⑵二甲苯无水酒精等量混合液5~10分钟。
⑶无水酒精3~5分钟。
⑷95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各3~5%分钟。
⑸1%番红酒精（50%）染24小时。
⑹70%酒精和805%酒精各1分钟。
⑺0.5%固绿酒精（95%）染15秒。
⑻无水酒精滴洗30秒。
⑼无水酒精南田村等量混合液30秒。
⑽二甲苯透明5~10分钟，树胶封固。
9.结晶紫真曙红染色法
10.酸性品红固绿染色法
11.Flemming番红结晶紫橘黄G染色法
12.Mallory酸性品红-苯胺蓝-橘黄G三色染色法
13.铁苏木精-酸性品红-苯胺蓝染色法
14.番红结晶紫橙黄G染色法
15.鞣酸-三氯化铁-番红-固绿染色法
16.Falg酸性品红-亮绿-橙黄G染色法
十 封固