MC3T3
细胞描述
MC3T3-E1小鼠颅顶前骨细胞。成纤维细胞样,有多个亚克隆,可以作为体外研究成骨细胞分化的良好模型。 从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。 从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。 MC3T3亚克隆4(ATCC CRL-2593)和MC3T3亚克隆14(ATCC CRL-2594)在抗坏血酸和3到4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。 它们10天后形成一个矿化良好的细胞外基质(ECM)。 MC3T3亚克隆24(ATCC CRL-2594)和MC3T3亚克隆30(ATCC CRL-2596)在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化。 不形成ECM, 可以作为亚克隆4和14的阴性对照。 矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA,及唾液酸糖蛋白(BSP),骨钙素(OCN),和甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。 高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质,表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfa1,一种成骨细胞相关转录因子。 植入免疫缺陷小鼠以后,高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨,低分化细胞只是产生纤维组织。 这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型,尤其是ECM信号。 它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。
细胞形态
成纤维细胞,贴壁生长
培养条件
a-MEM培养基,10% FBS; 37℃,5%
CO2,PH值7.2-7.4,无菌恒温培养。
质量检测
本细胞经过检测,不含细菌,真菌以及支原体
产品信息
货号
|
规格
|
培养基
|
运输
|
保存
|
XB- MC3T3-E1
|
2×106个/管
|
a-MEM+10%FBS
|
干冰或者活细胞寄送
|
液氮保存
|
用途
本产品仅供研究使用。
细胞相关操作
细胞复苏(针对液氮冻存细胞)
细胞实验室进行常规消毒,紫外照射30 min以上,超净台开启通风10 min.
细胞培养基(a-MEM +10%
FBS)37℃预热,移入细胞超净台前使用75%酒精擦拭消毒。
从液氮罐中取出细胞冻存管,立即置于37℃水浴中并快速摇动细胞冻存管,使其快速的融化。
在超净台中将冻存管中的细胞移入15ml离心管中,加入3ml新鲜细胞培养基后进行离心。800 rpm, 离心5 min。
在离心等待时间里,在细胞培养瓶(25-cm2)中加入新鲜完全细胞培养基5ml。
离心结束后,弃掉上清,在细胞沉淀中加入1ml新鲜培养基后轻轻地吹打混匀,将细胞移出加入培养瓶中。轻轻地前后左右混匀后,置于细胞培养箱中,37℃,5%
CO2 培养。
细胞传代
1.细胞融合度达到90%时,需要进行细胞传代。
2. 细胞实验室进行常规消毒,细胞培养基37℃预热。
3. 在超净台中弃掉细胞培养基,加入5ml 灭菌PBS进行冲洗,弃掉PBS后加入3ml 胰酶,室温或者置于细胞培养箱内37℃消化。
4.显微镜下观察细胞变圆,并且有部分细胞开始脱离皿底时,加入3-5ml细胞培养基(a-MEM+10% FBS)终止消化。
5.用细胞移液器轻轻吹打,将贴附在皿底或者瓶底的细胞吹起并将细胞吹散。
6.将细胞移入离心管中,800 rpm, 离心5 min。
7.离心结束后,弃掉细胞上清,并尽量去除干净。加入1ml完全培养基吹打混匀,取出300 µl细胞悬液接种到培养瓶中(一般按1:3接种。两到三天后传代)。
8. 将培养瓶置于37°C,5%
CO2的无菌培养箱中培养。
细胞冻存
1. 细胞实验室进行常规消毒,细胞培养基37℃预热。
2. 细胞融合度达到90%,将细胞进行消化,离心重悬后计数。
1)洗净晾干血球计数板和盖玻片,将盖玻片完全覆盖计数区;
2)充分混匀细胞,取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合,移液器吹吸混合均匀,用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞,以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳;
3)显微镜下,数四个计数区的总细胞数,无活性细胞染成蓝色,活细胞不被染色;
4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2;
这里10000是不变的,因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3计数池内,1cm3=1ml,将四个计数区的细胞数除以4取平均数,乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。
5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%。
注:细胞密度高时,可调整细胞悬液和台盼蓝的比例,计数时乘以相应的稀释倍数即可。
3.超净台内将细胞移入离心管中进行离心,800 rpm, 离心5 min。
4.弃掉上清,在细胞沉淀中加入冻存液(a-MEM +20% FBS+10% DMSO),调整细胞密度为2-4×106个/ml.
5.取1-1.5ml细胞悬液移入细胞冻存管中。
6.将装有细胞的冻存管放入冻存盒内,置于-80°C冰箱中过夜,之后可取出并保存于液氮中。若没有冻存盒,可以按照如下程序降温操作:4°C放置半小时,-20°C中放置2 h, 之后置于-80°C冰箱中过夜,最后取出置于液氮中保存。