腺病毒ADV构建技术原理

腺病毒（Adenovirus, ADV）是一种无包膜的线性双链DNA病毒，具有广泛的细胞和组织感染能力。感染过程剧烈，适于短时间内进行基因高表达的实验，与其它病毒相比，腺病毒最大优势在于插入片段较长，表达活性强。

　　体外应用时，腺病毒载体转基因效率高（接近100%的转导效率），且可转导不同类型的细胞，对于大量难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。但是，在体内应用时，由于腺病毒免疫原性强，感染剧烈，故常会引起动物局部组织炎症反应和机体免疫反应，对动物体征和实验结果的客观性造成影响。

腺病毒包装与纯化

　　腺病毒包装中表达质粒与穿梭质粒共转染293T细胞，待细胞出现CPE状态后通过收集和过滤细胞裂解物而纯化。

　　CPE（Cytopathic Effect）：病毒对组织培养细胞侵染后产生的细胞变性，利用此种病变效应可进行病毒定量。

腺病毒滴度检测

　　检测方法：酶联免疫法腺病毒滴度测定，根据计算感染后染成褐色的阳性细胞数，来计算病毒滴度

　　实验原理：腺病毒感染的阳性细胞表达的衣壳蛋白被染成褐色

　　检测方法：免疫显色方法。

　　实验原理：通过抗5型腺病毒外壳蛋白的单抗与感染腺病毒样品的细胞结合，再用HRP标记的二抗与一抗结合，经显色液显色，被感染的细胞变成褐色，根据阳性细胞数，来计算病毒滴度。

腺病毒载体优势

① 表达快，腺病毒感染细胞后，1-2天即可表达
② 载体容量大，感染效率高，常用于感染难感染的细胞
③ 不整合到染色体中，无插入致突变性
④  具有嗜肝性，易于感染肝细胞，腺病毒的体内应用通过是用于感染肝脏

　　不过由于腺病毒免疫原性高，对某些对外源刺激敏感的动物模型和组织中易造成炎症，体内应用需谨慎。