免疫组化：临床常用57个指标的意义
在上世纪30年代，免疫组织化学（Immunohistochemistry，简称IHC）的原理就已经为人所知，但直到1942年，第一个IHC研究成果才正式发表。这也被誉为免疫荧光技术的里程碑。哈佛大学医学院的Albert Coons在《免疫学杂志》上发表文章，利用FITC标记的抗体来鉴定感染组织中的肺炎球菌抗原。自那以后，组织固定方法、检测标记和显微镜都在不断改进，让免疫组化成为诊断和研究中的一个必备工具。
在病理科，利用特异的肿瘤标志物，医生通过IHC诊断肿瘤是良性还是恶性，确定肿瘤的分期和分级，并确定细胞类型和转移的来源，以便找到原发肿瘤的位置。同样，IHC也能用于药物开发，通过检测疾病靶点的上调或下调来判断药物疗效。免疫组化指的是根据抗体与抗原特异结合的原理来检测组织切片中的抗原（如蛋白）。immuno的词根来自操作中所使用的抗体，而histo意味着组织。另一种类似的技术是免疫细胞化学（Immunocytochemistry，简称ICC）。这两个词大家经常混着用，看着好像差不多，但实际上还是有点区别。对于IHC，组织是来自患者或动物，经过冷冻或石蜡包埋。将这些组织制成约4μm厚的切片，封片后再处理。通过这种方法，研究人员可观察细胞组分的定位，同时维持周围组织的原先结构。对于ICC，大部分细胞外基质及其他基质组分被去除，只剩下整个细胞来染色。ICC的来源可以是细胞悬液，来自患者或动物（如血涂片、拭子等），或在实验室中进行的组织培养细胞系。除了生物学来源，IHC和ICC在样品处理的程度上也有所不同。ICC需要透化，要么通过固定过程，要么是单独的透化步骤，这样抗体才能与细胞内的靶点相结合。而IHC可能不要单独的透化步骤，这取决于切片的厚度和固定方法。包埋在石蜡中的IHC切片必须进一步处理，才能进行抗体染色。一旦处理好样品，IHC和ICC的染色操作就几乎没什么差异了。当然，就染色而言，根据所使用的抗体来优化还是少不了的。恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。乳腺癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。1、P-糖蛋白（P-gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。2、谷光甘肽S转移酶（GST π）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。3、拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP-16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对 VP-16尤其有效。4、雌激素受体（ER）--性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。5、孕激素受体（PR）--性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。6、C-erbB-2--癌基因产物--胞浆--阳性率越高，肿瘤恶性程度越高。ER、PR 阳性而 C-erbB-2 也阳性者，用三苯氧胺治疗效果不好。7、Ki-67--细胞增殖标志--胞核--阳性率越高，肿瘤增殖越快，恶性程度越高。Ki-67 为细胞增殖的一种标记，在细胞周期 G1、S、G2、M 期均有表达，G0 期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。10、Rb ( retinoblastoma 视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。11、P53 在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短。12、Nm23 是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。目前已被广泛应用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤的检测。几乎所有的研究都表明，nm23 蛋白高表达患者淋巴结转移率相对较低，存活期相对较长。13、E-CaE 钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。14、PS2 雌激素调节蛋白，其表达和 ER 表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。15、CK18 低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。16、CK19 分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应。17、Heppar 1 肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。18、CK20 用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤 Merkel 细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。19、CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。20、Villin 绒毛蛋白，正常组织中，villin 通常只表达于有刷状缘的细胞上，如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中（特别是近曲小管）。Villin 在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率，具有明显腺样结构的肿瘤上没有 villin 表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低。乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显的 villin 免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。其他 villin 免疫组化染色通常为阴性表达的肿瘤还有：如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌和前列腺癌。间皮瘤也经常为 villin 阴性表达，因此在一些情况下 villin 还可以作为鉴别间皮瘤和腺癌使用抗体的一种。但是也有一些非胃肠道来源的肿瘤可表达 villin，如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌和小部分肺癌。也有一些专家报道 villin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。肝癌的诊断：villin 免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构，因此它也可能在表达部分肝癌的管状结构上很有用。多克隆 CEA 是用于此目的的第一种试剂，而且 CD10（CALLA）在表达肝癌的该结构上也非常有用。多克隆 CEA、villin 和 CD10（CALLA）在肝癌病例上的表达，相互之间并没有任何的冲突，因此如果怀疑肝癌的可能性，建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例的诊断。Villin 在神经内分泌肿瘤的研究上也很有帮助。众所周知，类癌和胰腺的胰岛细胞肿瘤具有相相似的形态学特征，仅在形态学上区分这两种肿瘤几乎是不可能的。Villin 在这种情况下特别有用，因为据文献报道在 85% 的胃肠道类癌病例中有 villin 的表达，但在胰岛细胞肿瘤上未见阳性表达报道。Villin 在类癌上的表达通常为胞膜阳性。另外，有一些证据表明 villin 在胃和下消化道的小细胞癌上的表达率比在其他部位的小细胞癌上要高。如：肺、食道、膀胱或前列腺等。据文献报道，大约有 40% 的肺类癌病例 villin 阳性，在其他一些神经内分泌肿瘤上，如甲状腺髓样癌和少数的美克尔细胞瘤上也有 villin 的表达。21、MRP1 多药耐药相关蛋白1，影响化疗敏感性，和预后相关。23、TS 胸苷合成酶，是 5-FU 重要作用靶点，如果其高表达，阳性反应++以上，提示肿瘤细胞对 5-FU 耐药。25、S-100 神经组织标志，存在于神经组织，垂体、颈动脉体，肾上腺髓质、唾液腺、少数间叶组织，常用于神经鞘瘤、恶黑、脂肪肉瘤、软骨肿瘤诊断。27、Chr 嗜铬素，肾上腺髓质含量很高，鉴别肾上腺髓质和皮质，用于神经内分泌肿瘤诊断。29、CKL 低分之角蛋白，主要标记单层上皮、腺上皮30、EMA 上皮膜抗原，糖蛋白，广泛分布各种上皮及其肿瘤32、P504 甲酰基辅酶A消旋酶检测诊断前列腺癌的敏感性为 97%，特异性为100%。33、AMACR 的优点在于它是癌症特异性，只存在于癌症组织。Rubin 称，AMACR 亦可用作其他癌症的诊断标志物。对各种癌症细胞进行检查后发现，结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤都过度表达 AMACR，以结肠直肠癌和前列腺癌表达最高。35、CD10 作为共同急性淋巴母细胞型白血病抗原，主要表达于未成熟淋巴细胞，在 Burkitt 淋巴癌，慢性髓性白血病等造血系统疾病的诊断中具有应用价值。近几年来发现该抗原在造血系统外的某些肿瘤中有表达，如子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤等。抗体在对肾细胞癌进行诊断和鉴别时有一定的参考价值。36、CD15 是一种细胞粘附分子，因其对霍奇金淋巴瘤（HD）中的 R-S 细胞具有良好的标记作用，被认为是 HD 的重要标志物。除 HD 的鉴别诊断外，对胃癌、结直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌等肿瘤 CD15 的表达研究发现，CD15 表达随癌细胞分化程度下降、淋巴结转移和临床分期增高而明显增高。认为 CDl5 的表达是判断肿瘤的发展、预测淋巴结转移和预后的良好指标。免疫电镜观察显示，CD15 抗原主要分布于大肠癌细胞浆的界膜、内质网、高尔基体及近细胞核膜处，CD15 可能是通过对所结合的铺基构型改变影响和参与肿瘤的形成和转移过程。38、CD56 为神经细胞黏附分子，主要分布于大多数神经外胚层来源细胞，常用于星型细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌肿瘤诊断，也是 NK 细胞瘤的重要标志，也标记小细胞肺癌。39、Des 结蛋白，广泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌细胞和肌上皮细胞，高分化高表达、低分化低表达。40、MSA 肌特异性肌动蛋白，广泛分布于几乎所有肌型细胞中。41、CD68 存在于骨髓和各神经组织的巨噬细胞，用于粒细胞白血病、各种单核细胞来源肿瘤、包括恶性纤维组织细胞瘤诊断（首选）。42、CD34 表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、内皮细胞、胚胎纤维母细胞和某些神经组织细胞，多用于标记血管内皮细胞，血管源性肿瘤的诊断，GIST 80-90%.44、CD44 是一种分布广泛的跨膜糖蛋白分子，分 CD44s 和 CD44v 两大类。CD44s 主要作为透明质酸受体，结合透明质酸后影响肿瘤的生长和转移。而 CD44v 则主要表达于转移的肿瘤细胞。李道明等用免疫组化 LSAB 法检测了 42 例食管鳞癌CD44v 4/5的表达，结果发现，淋巴结转移组的阳性表达率为76.19% (16/21)，而非转移组的阳性率为42.86% (9/12)，两组间有显著性差异。癌巢周边的癌细胞、肌间浸润的癌细胞、有核分裂的癌细胞和癌栓中的 癌细胞及浸润脉管壁的癌细胞均呈强阳性表达。张成武等检测了20例正常胃粘膜上皮、43 例异型增生和85 例胃癌组织 CD44v6 的表达，结果正常胃粘膜无表达，而异型增生和胃癌组织阳性率分别为30.2% 和74.1%，其表达强度与胃癌浸润深度、淋巴结转移、肿瘤生长方式、静脉和淋巴管侵袭及远处转移密切相关。以上结果均表明，CD44v 的高表达构成了肿瘤细胞的侵袭性与易转移性。49、GFAP 胶质纤维酸性蛋白 神经组织标志，多用于星形胶质瘤诊断53、N-myc 表达增强的小细胞肺癌和神经母细胞瘤对化疗缺乏反应并进展快速；54、bcl-2 耐药机理为抗凋亡作用，高表达者对多数抗癌药物/放射治疗耐受。55、TGA72 肿瘤相关抗原72，多种恶性上皮性肿瘤表达 TGA72，尤其是乳腺癌、卵巢癌和结肠癌。正常上皮细胞、肉瘤、淋巴造血系统肿瘤通常TGA72 阴性。TGA72 抗体用于乳腺癌的研究较多，其高表达通常与肿瘤体积大、淋巴结转移瘤细胞分化差及高增殖活性有关。56、GA733 肿瘤相关抗原，编码上皮糖蛋白 40，是一种上皮细胞黏附分子（EP-CAM)，对上皮细胞的生长与分化起着重要作用。多种肿瘤可有 GA733 表达，尤其是乳腺癌、结肠癌及肺癌等。Kubuschok 等采用 GA733 对非小细胞肺癌手术切除淋巴结中隐匿性微转移灶进行检测，发现隐匿灶的检出是判断总生存率的独立预后因子。结肠癌 GA733 表达形式与肿瘤预后有关，细胞膜及细胞浆的表达预后较基膜侧的表达为差。57、TTF-1 甲状腺转录因子-1，TTF-1 表达于甲状腺腺上皮和肺的上皮细胞中。在肺肿瘤研究中发现，大多数肺的小细胞癌、原发性和转移性肺腺癌、少部分大细胞未分化肺癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示 TTF-1 阳性，而肺鳞癌及绝大多数典型类癌 TTF-1 阴性。在甲状腺乳头状腺癌中 TTF-1 亦阳性，而 TTF 在其它组织表达阴性。据此认为 TTF-1 可用来鉴别肺腺癌与鳞癌，并有助于与肺转移性腺癌的鉴别。TTF-1 主要表达在甲状腺滤泡细胞中和甲状旁腺的主细胞中，TTF-1 为甲状腺分化和甲状腺球蛋白分泌调节的基础物质，可促进甲状腺过氧化物酶、碘/钠的转运，TTF-1 与血清 TSH 的活性有关，活性的 TSH-R 可增强 TTF-1 的表达。TTF-1 在良恶性甲状腺组织中表达不同，正常甲状腺和良性腺瘤表达多，甲状腺乳头状癌与滤泡癌中表达少，未分化癌中不表达TTF-1 在恶性甲状腺病变中的表达强度随年龄增加而增强，而且病变存瘤期长，复发机率高。75% 的肺非小细胞癌（NSCLCs）阳性表达，腺癌（ACs）明显高于鳞癌（SCC），90% 以上的原发性小细胞肺癌（SCLC）表达阳性，TTF-1 在非小细胞肺癌（NSCLCs）阳性表达强度与病人的预后成呈负相关，可作为一项独立的预后指标。肺的典型性类癌（TCS）均为阴性，表明小细胞肺癌和非小细胞肺癌可能有一个不同于 TCS 的共同起源的理论。
