氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基有什么效果
KSOM培养基(KSOM Medium)是一种小鼠胚胎培养液。KSOM培养基能够让受精卵克服双细胞障碍,支持体外和体内发育。KSOM培养基能够获得更高的细胞分裂率,产生更多的囊胚发育。
KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响
目的囊胚发育率低和发育迟缓是继"2-细胞阻滞"解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题。实验通过对KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成。方法采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120 h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果。
结果在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120 h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用。
结论通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育。
增加葡萄糖的影响
相关研究表明,在未加氨基酸时,单独增加KSOM中葡萄糖和BSA浓度或同时增加二者浓度,对早期囊胚的形成率和囊胚卵裂球数无显著影响,几种情况下,KSOM与以往报道的培养基想必,均显示了较高的囊胚形成率和囊胚卵裂球数。
增加BSA的影响
KSOM中BSA的浓度已经基本能满足胚胎发育到早期囊胚的需求。
增加氨基酸的影响
KSOM中单独添加氨基酸在囊胚发育的中后期显示明显的促进作用,部分孵出和完全孵出的比例明显提高,囊胚卵裂球数明显增加,显示了氨基酸在发育后期有BSA不可替代的加快生长和促进分化作用。
研究表明,通过增加KSOM培养基中葡萄糖和BSA浓度,同时添加一定浓度的Eagle必需氨基酸和非必需氨基酸,能很好的满足小鼠植入前期胚体外生长、发育的需求。