细胞炎症模型构建流程
1、细胞铺板:选择生长状况良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7消化,离心后重悬计数,选择合适的细胞浓度稀释(2~3×104/孔)。
2、铺板:将重悬好的细胞液倒入加样槽中,吹打细胞, 混匀加样,每孔加入100 µL ,2~3列加样后重新吹打均匀(细胞易沉降),边缘孔每孔加入100 µL
PBS。
3、放入细胞培养箱,5 % CO2 、37 ℃条件下继续培养过夜。
4、配药:样品 S,配制10 mg/mL溶于1 mL无菌水;样品A,配制200mg/mL溶于1 mL DMSO,分别用高糖DMEM(含10%FBS)稀释成不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8 和 1 mg/mL)。
5、将96孔板过夜培养后将完全培养液倒出,按设置的浓度梯度提取物加药,每个浓度设置3个重复样,培养 24 h。
6、将已加药培养过夜(加药时细胞接近平铺满孔底)的 96 孔板中培养基倒出,每个孔中加入50 µL亚甲基蓝染液。
7、放入细胞培养箱孵育 1 小时后取出,洗去亚甲基蓝染色液。
8、测 OD 值:每孔加100 µL洗脱液,培养液震荡15 min,放入酶标仪,继续震荡3 min后,595 nm 波长读数。
9、分析数据,需要先得出对照组的平均值,各个实验数据/对照平均值×100%得出细胞存活率,算出各个数值之间的偏差,分析药物对细胞的毒性。
实验结果:
结论:样品S在所用的浓度下,对细胞活性有显著抑制作用。
结论:样品A在所用的浓度下,对细胞活性有显著抑制作用。
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