荧光免疫印迹(Western Blot)实验服务优势及实验流程

一,实验原理

WB(Western blot),即免疫印迹(immunoblotting),是一项在分子生物学、生物化学、免疫学等领域中应用非常广泛的技术。这一技术利用抗体与组织或细胞样品中特定蛋白的特异性结合作用,根据条带的位置和强弱实现蛋白鉴定和表达分析。常用的WB显色方法是ECL化学发光法。

而随着荧光检测的普及,许多科研人员将western blot的检测方法从化学发光转到多重荧光。这是因为荧光检测能够实现多重western blot分析,并生成可定量的精准数据满足期刊杂志对于数据发表的要求。荧光检测解决了化学发光检测所面临的一些局限性,例如:数据的重现性,半定量,动态范围等问题。所以荧光Western blot变得越来越流行。对于需要更复杂的信号线性分析和蛋白丰度相关性的研究人员来说,荧光方法是一个很好的选择。

二、荧光WB的优势:

可以同时检测多个目的蛋白:

可以区分分子量相近的蛋白:

可准确定量:

低背景,高信噪比:

线性范围更广,适合检测低丰度蛋白:

三、荧光WB技术操作步骤

蛋白样本制备及含量检测;

SDS-PAGE凝胶电泳;

转膜及抗体结合反应;

LI-COR Odyssey红外激光扫描成像系扫描

四、客户提供及送样要求

需检测的样品;

一抗(可自行提供,或在本公司购买相应指标);

内参抗体由安赛思提供。

送样要求:

离体后迅速超低温处理并-80 ℃冻存的组织样品,干冰运输;

组织:动物组织应不少于100 mg,植物组织不少于500 mg;

细胞:大于5×106个细胞;

煮沸变性后的蛋白样本,冰袋运输。

五、最终交付

WB检测结果图片和完整实验报告

七、annsci 案例展示

红色:GAPDH-Dylight 680;

绿色:AKT Dylight 800

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