Masson三色染色法(固定液处理）
Masson三色染色法
选择固定液很重要
Ⅰ 固定液：甲醛升汞液
⑴流水冲洗，入70%酒精，加碘液脱汞至酒精呈极浅的棕色，5%硫代硫酸钠（sodium hyposulfite）水溶液去碘，水洗
⑵70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水
⑶二甲苯透明
⑷浸蜡两次
⑸石蜡包埋
⑹切片8微米以下，贴片，烘干
⑺切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水
⑻1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟，蒸馏水洗去多余染料
地衣红液：80%酒精100毫升，地衣红（orcein）1克，盐酸（hydrochloric acid ）1毫升
⑼Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟，充分水洗
⑽必要时用盐酸酒精分色，自来水洗至切片呈蓝色
⑾丽春红品红液染色5~10分钟，用滤纸沾干
丽春红品红液：蒸馏水100毫升，依次溶解：丽春红（Ponceau S）0.8克，酸性品红（acid fuchsin）0.4克，冰醋酸(glacial acetic acid)1毫升
⑿0.5%醋酸(acetic acid)水溶液洗30~60秒，蒸馏水略洗
⒀1%磷钼酸(phosphomolybdic acid hydrate)水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色
⒁1%醋酸水溶液洗30秒
⒂2%亮绿液染色3~5分钟
亮绿液：蒸馏水98毫升，亮绿Y(Light green Y) 2克，冰醋酸2毫升
⒃1%醋酸水溶液洗涤
⒄95%酒精和无水酒精脱水各1分钟
⒅二甲苯透明，中性树胶封片
结果：胶原纤维绿色；弹性纤维棕色或深棕色；肌纤维红色；纤维素红色；红细胞红色；细胞核蓝黑色
Ⅱ 固定液：Zenker液
⑴流水冲洗，入70%酒精，加碘液脱汞至酒精呈极浅的棕色，5%硫代硫酸钠水溶液去碘，水洗
⑵70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水
⑶二甲苯透明
⑷浸蜡两次
⑸石蜡包埋
⑹切片8微米以下，贴片，烘干
⑺切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水
⑻1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟，蒸馏水洗去多余染料
地衣红液：80%酒精100毫升，地衣红1克，盐酸1毫升
⑼Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟，充分水洗
⑽必要时用盐酸酒精分色，自来水洗至切片呈蓝色
⑾丽春红品红液染色5~10分钟，用滤纸沾干
丽春红品红液：蒸馏水100毫升，依次溶解：丽春红0.8克，酸性品红0.4克，冰醋酸1毫升
⑿0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸馏水略洗
⒀1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色
⒁1%醋酸水溶液洗30秒
⒂2%亮绿液染色3~5分钟
亮绿液：蒸馏水98毫升，亮绿Y2克，冰醋酸2毫升
⒃1%醋酸水溶液洗涤
⒄95%酒精和无水酒精脱水各1分钟
⒅二甲苯透明，中性树胶封片
结果：胶原纤维绿色；弹性纤维棕色或深棕色；肌纤维红色；纤维素红色；红细胞红色；细胞核蓝黑色
Ⅲ 固定液：Bouin液
⑴入70~80%酒精浸泡至基本无黄色（可加少量碳酸锂帮助脱去黄色）
⑵90%酒精 、95%酒精、无水酒精脱水
⑶二甲苯透明
⑷浸蜡，包埋，切片小于8微米，粘片，烘干
⑸切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水
⑹1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟，蒸馏水洗去多余染料
地衣红液：80%酒精100毫升，地衣红1克，盐酸1毫升
⑺Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟，充分水洗
⑻必要时用盐酸酒精分色，自来水洗至切片呈蓝色
⑼丽春红品红液染色5~10分钟，用滤纸沾干
丽春红品红液：蒸馏水100毫升，依次溶解：丽春红0.8克，酸性品红0.4克，冰醋酸1毫升
⑽0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸馏水略洗
⑾1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色
⑿1%醋酸水溶液洗30秒
⒀2%亮绿液染色3~5分钟
亮绿液：蒸馏水98毫升，亮绿Y2克，冰醋酸2毫升
⒁1%醋酸水溶液洗涤
⒂95%酒精和无水酒精脱水各1分钟
⒃二甲苯透明，中性树胶封片
结果：胶原纤维绿色；弹性纤维棕色或深棕色；肌纤维红色；纤维素红色；红细胞红色；细胞核蓝黑色
Ⅳ 固定液：甲醛（水或生理盐水或磷酸盐缓冲液）、多聚甲醛
染色前必须用升汞(mercuric chloride)液或苦味酸(picric acid)酒精液媒染。
⑴组织块常规脱水，石蜡包埋，切片不超过8微米
⑵切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水
⑶在3%升汞液或苦味酸酒精溶液媒染1小时
⑷1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟，蒸馏水洗去多余染料
地衣红液：80%酒精100毫升，地衣红1克，盐酸1毫升
⑸Weigert苏木精或明矾苏木精(alum hematoxylin)染细胞核10~15分钟，充分水洗
⑹必要时用盐酸酒精分色，自来水洗至切片呈蓝色
⑺丽春红品红液染色5~10分钟，用滤纸沾干
丽春红品红液：蒸馏水100毫升，依次溶解：丽春红0.8克，酸性品红0.4克，冰醋酸1毫升
⑻0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸馏水略洗
⑼1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色
⑽1%醋酸水溶液洗30秒
⑾2%亮绿液染色3~5分钟
亮绿液：蒸馏水98毫升，亮绿Y2克，冰醋酸2毫升
⑿1%醋酸水溶液洗涤
⒀95%酒精和无水酒精脱水各1分钟
⒁二甲苯透明，中性树胶封片
结果：胶原纤维绿色；弹性纤维棕色或深棕色；肌纤维红色；纤维素红色；红细胞红色；细胞核蓝黑色
可用地衣红染弹性纤维。分色时镜检。醋酸分色不要过度。亮绿可用苯胺蓝代替
附：Weigert铁苏木精染色法
两液分别配制，用时混合。只能用几次。
A液：1%苏木精（95%酒精）溶液 10毫升
B液：29%氯化铁(ferric trichloride)水溶液4毫升，盐酸（25%）1毫升，蒸馏水95毫升
（三氯化铁1.16克，蒸馏水98毫升，盐酸1毫升）
使用时将A、B两液等量混合（各50毫升），染色数分钟。
附：明矾苏木精
1 Hansen铬明矾苏木精
4%铬明矾水溶液：铬明矾(chromic potassium sulfate)10克溶于蒸馏水250毫升，煮沸至溶液呈绿色
苏木精(haematoxylin)1克溶于热蒸馏水15毫升
10%硫酸（2N）水溶液：浓硫酸(sulfuric acid)10毫升，蒸馏水90毫升
2.76%重铬酸钾水溶液：重铬酸钾(potassium dichromate )0.552克溶于蒸馏水20毫升
充分振荡混合；
再加10%硫酸（2N）5毫升
苏木精水溶液倒入铬明矾液，充分振荡混合，加入硫酸液5毫升
倒入重铬酸钾液20毫升，煮沸1~2分钟。待溶液冷却后过滤。
此液保存性好，不会过染，也不易褐色
染30秒至2分钟，可使细胞核呈蓝黑色；若硫酸减至1~3毫升，可使细胞浆着色，也能染神经元内的尼氏体（虎斑）
2 Mayer酸性明矾苏木精
苏木精1克，蒸馏水100毫升；碘酸钠(sodium iodate )0.2克，钾明矾(aluminium potassium sulfate)50克。加温溶解，溶液呈蓝紫色。
加水合氯醛(chloral hydrate)50克，枸橼酸(citric acid)1克，溶液呈红紫色。能长久保存。陈液着色力较强。可用2%钾明矾水溶液稀释，染后流水洗至细胞核至深蓝色。
切片染色4~6分钟，小块组织染24小时。
3 Mayer钾明矾苏木红
苏木红（haematein）1克溶于95%酒精50毫升，稍加温溶解。加5%钾明矾（aluminium potassium sulfate)水溶液100毫升，最后加樟脑(camphor)少许防腐。
4 Delafield苏木精
苏木精4克溶于无水酒精25毫升，倒入10%铵明矾（aluminum ammonium sulfate）水溶液400毫升，置有光处3~4天，过滤，加甘油(glycerin)和甲醇(methanol)各100毫升。数日后过滤。能长久使用。
此液对细胞核和嗜碱性物质染色效果很好。着色力强。
一般染色数分钟；也可用蒸馏水稀释50~100倍，染色4~24小时。
5 Ehrlich酸性苏木精
苏木精2克溶于95%酒精100毫升，加蒸馏水及纯甘油各100毫升、钾明矾3克、冰醋酸10毫升。混合后溶液呈红色。用纱布封闭瓶盖，2周后成熟，溶液呈暗红紫色。
切片染数分钟。
此液适合于块染，需用蒸馏水或50%酒精稀释4~5倍，小块组织染1~2天。
6 Harris苏木精
10%苏木精（95%或无水酒精）溶液10毫升与10%钾明矾水溶液（加热溶解）200毫升混合于1000毫升烧瓶内。继续加热煮沸1分钟，停火，缓慢加氧化汞(mercuric oxide)0.5克，再加热煮沸1分钟。迅速将三角烧瓶放入冷水中冷却。可加冰醋酸5~10毫升，加强细胞核的着色能力。
切片染色约3~10分钟。
不适合整块组织染色。