Transwell侵袭实验操作步骤

1、实验前一天，将已经分装后的一管Matrigel基质胶从-20℃提前放入4℃冰箱过夜，Matrigel胶即从固体状态融化为液体状态。

　　2、包被基底膜：Matrigel基质胶以1：8稀释后包被transwell小室底部膜的上室面(整个过程注意冰上操作，否则Matrigel在10℃以上即会凝固)，3小时风干。

　　3、水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50μL 10g/LBSA的无血清培养液，37 ℃，30min。

　　4、常规胰酶消化细胞，PBS洗1-2遍去除血清的影响，用无血清培养基重悬细胞，调整细胞密度为5*105个/mL。

　　5、取200μL细胞悬液加入Transwell小室上室， 24孔培养板下室内加入600μL 含10% FBS培养基。注意下层培养液与小室之间不要产生气泡。

　　6、培养板置于37℃的CO2培养箱中，依据肿瘤细胞侵袭能力而定培养12-48h。

　　7、取出小室，PBS淋洗2遍，用棉签小心擦去小室微孔膜上层内的细胞，在24孔板内4%多聚甲醛(或95%酒精)固定20 min，结晶紫溶液染色15 min。

　　8、倒置显微镜下拍照，每个样本随机计数10个视野，取平均值，统计分析。