二代测序建库流程关键酶

随着二代测序成本的不断降低，我们开始更加关注测序数据的质量，而文库构建过程中数据信息的完整性和稳定性则对最终的测序数据质量至关重要。 LGC Biosearch Technologies，拥有9年以上二代测序酶生产经验的厂商，可以为您提供二代测序建库流程中所有的关键酶，保证您的文库构建更加精准高效！

二代测序建库流程

RNA建库

1

mRNA富集/rRNA去除

  • Terminator5

  • 热稳定RNA酶H

2

第一链cDNA合成

  • Episcript RNA酶抑制剂

  • RiboGuard™ RNA酶抑制剂

  • NxGen酶抑制剂

3

第二链合成

  • Klenow DNA聚合酶

4

片段化...

DNA建库

5

末端修复/加A尾

  • T4 DNA聚合酶

  • T4 磷酸激酶

  • Taq98™ DNA聚合酶

6

加接头

  • NxGen™ T4连接酶

7

纯化、上机

相关产品及用途列表

具体产品介绍

1. TerminatorTM 5′-Phosphate-Dependent Exonuclease

  • 特异性水解5′单磷酸RNA（如rRNA）不影响mRNA

  • 富集mRNA，去除rRNA

2. Hybridase™ Thermostable RNase H

热稳定RNase H

  • RNA的选择性降解(rRNA removal):针对rRNA设计DNA探针，利用热稳定RNase H选择性切割DNA/RNA杂合链，精准去除背景RNA。详细步骤可参见参考文献*。
    *Morlan JD, Qu K, Sinicropi DV (2012) Selective Depletion of rRNA Enables Whole Transcriptome Profiling of Archival Fixed Tissue. PLoS ONE 7(8): e42882.

3. Episcript逆转录酶

可从皮克级别的总RNA中逆转录得到长达12kbp 的全长cDNA，无RNase H活性， 适用于长read 的测序仪的文库构建

4. NxGENTM 及Riboguard RNA酶抑制剂

  • NxGENTM RNA酶抑制剂为一个猪RNA酶抑制基因(52KDa蛋白)融合了我们专利的22.5 kDa 蛋白标签；

  • 可抑制 RNase A, RNase B及 RNase C对RNA样品的影响，保护RNA样品；

  • 可直接加入RNA样品，并兼容反转录反应；

5. T4 DNA 聚合酶

加A尾前形成DNA平末端

  • 在模板和引物存在的情况下催化5’→3’DNA合成

    ——5’ 补齐

    ——DNA 合成（高保真）

  • 包含3’→5’ 外切酶活性

  • 无链置换活性

  • 需在75°C热失活20分钟

6. NxGen T4 DNA 连接酶

  • ATP-dependent 酶，连接拥有5′ 磷酸和 3′ 羟基平或粘性末端的双链DNA 分子；

  • 对单链核酸无活性；

  • 需在65°C热失活10分钟；

7. T4 多核苷酸激酶

5’末端磷酸化酶关键酶

  • 可将磷酸集团从ATP转移到5’ 羟基末端，适用于双链DNA, 单链DNA, 双链RNA 及单链RNA；

  • 主要应用为5’磷酸化，使DNA或RNA适合于连接反应（在连接酶的作用下连接两个或更多的DNA或RNA分子）

    ——NGS 建库

    ——Ligation-based PCR assays

  • 需在65°C热失活20分钟

8. Taq98™ DNA聚合酶

提升DNA 聚合酶加A尾效率

  1. 在模板和引物存在的情况下催化5’→3’DNA合成；

  2. 具有加A尾活性：

    Used in T-A cloning to generate fragments with single 3’ A overhangs

  3. 也可用于PCR，比标准Taq DNA 聚合酶具有更强的热稳定性；

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