一种纯中药舒筋活络油及其制备方法与流程

本发明涉及中药复方制剂领域，特别涉及一种纯中药舒筋活络油及其制备方法。
背景技术：
：活络油有舒筋活络、祛风散瘀的功效，适合用于各种跌打损伤、关节疼痛、腰酸背疼、筋骨绷紧等症状的治疗。活络油主要为中药成分，可以起到整体调节各个关节作用，有良好的功效。对风湿骨痛有一定帮助。活络油的主要成分为由冬青油(水杨酸甲酯)、薄荷脑、松节油、樟脑、桉叶油、肉桂油、丁香油、百里香酚等构成。跌打损伤主要以软组织损伤为主，伴随着各种肿痛、胀痛表现。这是因为跌打损伤会导致毛细血管渗出或出血，从而形成组织的血液沉淀物，引发无菌性炎症，因而使人感到组织疼痛和肿胀。风湿骨痛是由于寒风湿气入侵人体所导致，会导致肌腱阻塞不通，由此引起关节、肌肉等多个部位疼痛、发红、胀痛。经络是人体中联系人体的道路，如果能够疏通，可以保证人体血气的正常运行，从而能减少疼痛，达到迅速治疗疾病的效果。目前，中药的提取方法主要有水煎提取法、乙醇回流提取法、超临界流体萃取法等。超临界流体萃取法作为一种新兴的中药提取工艺，近年来越来越多的受到人们的关注。超临界co2作为在萃取技术广泛应用于植物天然化合物的提取，具有如下的显著优点：操作接近室温(34～39℃)，有效地防止了热敏性物质的氧化和降解。能完整的保留生物活性，而且能把高沸点、低挥发性、易热解的物质在远低于其沸点的温度下萃取出来；萃取和分离合二为一，当饱含溶解物的co2流体进入分离器时，经过调节压力或温度，使得co2与萃取物迅速成为气液两相而立即分开，不仅萃取的效率高而且能耗较少；co2作为一种惰性气体，无味、无臭、无毒、安全性非常好；萃取能力强，提取率高；提取时间快，生产周期短。压力和温度都可以成为调节萃取过程的参数，只通过改变萃取温度和压力就可以达到萃取的目的，改变分离压力或温度就可以达到分离的目的，因此工艺简单容易掌握，而且萃取的速度快。但超临界co2萃取技术在植物提取物中的应用也存在一定的局限性：如当混合物中的组分间的相对挥发度或极性有较大差别时，需要在不同萃取压力下使混合物得到分馏；含强极性基团(羰基或多个羟基)的化合物，如黄酮，多酚类，萃取困难；强极性物质，如糖类，在压力低于40mpa时很难被萃取出来，分子量过大的化合物，如多糖类，也很难被萃取。目前，中药活络油的制备多为中药类植物提取物相互混合或中药原料混合后直接提纯，虽然具有一定的活血化瘀的作用，但活络油中的组分复杂，各种主要成分也多为挥发性混合物，有效成分含量不清楚，无法有针对性的提高主要治疗组分，导致进一步提高药效较为困难。中药成分上多为活血化瘀的药物，而很少提及抗炎及抗氧化修复，在缓解慢性疼痛及疼痛后修复上仍然存在欠缺。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题：针对目前中药活络油制备过程中存在的诸多问题，本发明提供一种纯中药舒筋活络油及其制备方法，将靶向提取物集中于酚类、萜类等化合物上，大幅提高上述活性物质的含量及保留其活性，利用上述化合物的镇痛、抗炎、活血、修复的作用治疗跌打损伤及其他慢性疼痛。为解决上述技术问题，本发明提供以下的技术方案：一种纯中药舒筋活络油，由如下重量份的原料制成：20～40份石菖蒲、15～20份三七、35～50份川芎、25～35份丁香、35～50份丹皮、30～60份石见穿、10～18份莪术、50～80份虎杖、20～35份苦艾、60～90份赤芍、20～40份石香薷、10～20份八角茴香、10～15份广藿香、15～45份穿心莲、10～30份麝香、50～100份精油；所述纯中药舒筋活络油由生药提取物和精油组成，所述生药提取物由回收油和中药油组成，所述回收油：中药油：精油的重量比为1～3:5～10:5；所述生药提取物含15.33～24.57wt％萜类化合物，3.21～5.34wt％丁香油酚，7.56～11.23wt％黄酮类化合物，22.54～31.25wt％多酚类化合物。优选地，所述萜类化合物包含33.56～45.27wt％单萜、30.29～43.11wt％倍半萜；所述多酚类化合物包含56.88～74.53wt％白藜芦醇；所述黄酮类化合物包含33.25～50.34wt％芍药苷。优选地，所述精油包含艾草精油、玫瑰精油、薰衣草精油、红花精油、薄荷油、樟脑精油、冬青精油、辣椒精油中的一种或多种；所述石菖蒲、三七、川芎、丁香、丹皮、石见穿、莪术、虎杖、苦艾、赤芍、石香薷、八角茴香、广藿香、穿心莲、麝香均为干品或中药饮片。一种上述纯中药舒筋活络油的制备方法，包含如下具体步骤：(1)将除精油外的生药原料粉碎后过80～100目筛，1～3倍体积60～80％乙醇水溶液浸泡24～48h，抽滤，将滤液用滤纸过滤，置于旋转蒸发仪上于35℃进行减压蒸馏，除掉溶液中的乙醇，得提取物水溶液，将提取物水溶液用石油醚反复萃取3次，每次100ml，收集到锥形瓶中，将下层水溶液取出，用乙酸乙酯反复萃取3次，每次100ml，收集到锥形瓶中，将下层水溶液取出，再用正丁醇反复萃取3次，收集到锥形瓶中，将剩余部分同样收集到锥形瓶中；(2)抽滤后将原料粉末投入co2超临界萃取釜中，按照萃取温度40～60℃，萃取压力2～30mpa，5～10wt％夹带剂，co2流速10～30kg/h，进行萃取，萃取时间0.5～1.5h，萃取液过0.22μm滤膜，滤液在分液漏斗中以正己烷萃取，将正己烷萃取物与步骤(1)中石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物混合，于60℃旋转蒸发仪浓缩去除有机萃取剂得中药油；(3)按料水重量比1:10～60将生药原料萃取后的药渣进行共水蒸馏，蒸馏过程中持续加入蒸馏水以补充馏出液，蒸馏1～3h，以50～500ml馏出液为单位进行收集，收集后用等体积无水乙醚萃取1h，然后分液收集乙醚，再加入无水硫酸钠干燥，将萃取用乙醚在水浴50℃下回收溶剂，收得粗提物；(4)使用150-250目的硅胶装柱制备层析柱，按径高比1:8～16装柱后，称量粗提物，按重量比1:3将粗提物溶于洗脱液，室温上样，用洗脱液作为流动相洗脱，洗脱液流速为1.0～3.8ml/min以10～30ml为一个单位收集洗脱液，洗脱的同时，用薄层层析点样跟踪分析，根据点样情况收集流份，收集有效流份后，在室温下减压挥发溶剂得回收油；所述洗脱液由乙酸乙酯:石油醚按体积比1:10～20配制；(5)将回收油：中药油：精油按1～3:5～10:5的重量比混合，加入15～25wt％活性炭脱色1～7d，10000rpm离心30min，取上清即得纯中药舒筋活络油。优选地，所述co2超临界萃取中萃取时间由动态萃取时间和静态萃取时间组成，动态萃取时间：静态萃取时间＝2～4:1，所述步骤(4)中上样量为粗提物与硅胶质量比为1:45～200。优选地，所述夹带剂为无水乙醇；所述步骤(3)还包括共水蒸馏时进行超声处理，具体步骤如下：蒸馏开始后15min进行25～45khz频率的超声处理，以工作5min，停止10min作为一个处理周期，连续处理3～10个周期。本发明获得的有益效果：(1)采用多种具有镇痛、活血和抗炎效果的中草药作为原料，其中丁香、苦艾、石香薷、八角茴香、广藿香、穿心莲、麝香富含单萜和倍半萜等挥发性萜类化合物，可促进血液循环，镇痛，达到活血化瘀的作用，川芎、虎杖富含川芎嗪、白藜芦醇等具有抗炎镇痛的化合物，赤芍、丹皮富含芍药苷等抗炎镇痛化合物，三七、石菖蒲、石见穿、莪术作为使药，可显著提高药物的吸收及降低药物毒性，显著提高中药组方的镇痛、活血及疼痛后修复效果。(2)通过二氧化碳超临界萃取，有效提高不同物质的萃取，优化超临界萃取的萃取压力、萃取温度等工艺参数显著提高大部分中药活性物质的萃取率和活性，克服热回流等常规提取方法对复杂中药成分提取率低，活性物质易热失活，易氧化的缺点。(3)有效成分中萜类化合物、芍药苷等黄酮类、白藜芦醇等多酚化合物为含多个羰基和羟基的化合物，二氧化碳超临界提取对上述物质的萃取困难，提取率低，因此辅助多种有机溶剂萃取及硅胶柱纯化可靶向提取分离萃取超临界萃取后药渣中的上述活性物质，弥补超临界萃取对个别有效活性物质提取率低的缺陷，常规蒸馏提取与超临界萃取相互搭配，总萜类、总黄酮、总多酚提取率和活性显著高于单一方法提取，最大限度的提取药物主要有效成分，提高生药原料的利用率。具体实施方式下面通过对实施例的描述，对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，以帮助本领域的技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。实施例1：按如下方法制备纯中药舒筋活络油：一、原料的准备夹带剂为无水乙醇；精油为辣椒精油。石菖蒲、三七、川芎、丁香、丹皮、石见穿、莪术、虎杖、苦艾、赤芍、石香薷、八角茴香、广藿香、穿心莲、麝香均为干品或中药饮片。二、纯中药舒筋活络油的制备(1)按如下重量份称取生药原料：20份石菖蒲、15份三七、35份川芎、25份丁香、35份丹皮、30份石见穿、10份莪术、50份虎杖、20份苦艾、60份赤芍、20份石香薷、10份八角茴香、10份广藿香、15份穿心莲、10份麝香生药原料粉碎后过80目筛，1倍体积60％乙醇水溶液浸泡24h，抽滤，将滤液用滤纸过滤，置于旋转蒸发仪上于35℃进行减压蒸馏，除掉溶液中的乙醇，得提取物水溶液，将提取物水溶液用石油醚反复萃取3次，每次100ml，收集到锥形瓶中，将下层水溶液取出，用乙酸乙酯反复萃取3次，每次100ml，收集到锥形瓶中，将下层水溶液取出，再用正丁醇反复萃取3次，收集到锥形瓶中，将剩余部分同样收集到锥形瓶中；(2)抽滤后将原料粉末投入co2超临界萃取釜中，按照萃取温度40℃，萃取压力2mpa恒压，5wt％夹带剂，co2流速10kg/h，先进行动态萃取，萃取时间为20min，再进行静态萃取，萃取时间为10min，动态萃取时间：静态萃取时间＝2:1，萃取液过0.22μm滤膜，滤液在分液漏斗中以等体积正己烷萃取，将正己烷萃取物与上步中石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物混合，于60℃旋转蒸发仪浓缩去除有机萃取剂得中药油；(3)按料水重量比1:10将生药原料萃取后的药渣进行共水蒸馏，蒸馏过程中持续加入蒸馏水以补充馏出液，蒸馏1h，共水蒸馏同时进行超声处理，具体步骤如下：蒸馏开始后15min进行25khz频率的超声处理，以工作5min，停止10min作为一个处理周期，连续处理3个周期。以50ml馏出液为单位进行收集，收集后用等体积无水乙醚萃取1h，然后分液收集乙醚，再加入无水硫酸钠干燥，将萃取用乙醚在水浴50℃下回收溶剂，收得粗提物；(4)使用150目的硅胶装柱制备层析柱，按径高比1:8装柱后，称量粗提物，按重量比1:3将粗提物溶于洗脱液，室温上样，上样量为粗提物与硅胶质量比为1:45，用洗脱液作为流动相洗脱，洗脱液流速为1.0ml/min以10ml为一个单位收集洗脱液，洗脱的同时，用薄层层析点样跟踪分析，根据点样情况收集流份，收集有效流份后，在室温下减压挥发溶剂得回收油；所述洗脱液由乙酸乙酯:石油醚按体积比1:10配制；(5)将回收油：中药油：精油按1:5:5的重量比混合，加入15wt％活性炭脱色1d，10000rpm离心30min，取上清即得纯中药舒筋活络油。将回收油与中药油按比例混合后按照气相色谱法(中国药典2015版二部附录ve)测定成分。色谱柱为hp-5ms型石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25,um)，柱流量1.0ml/min，载气为高纯度氦气(99.999％)，柱前压7.65psi。程序升温:初始温度130℃,以每分钟1.5℃的速率升温至150℃，以每分钟1℃的速率升温至165℃，进样口温度280℃，分流比20:1。离子源为ei源，离子源温度230℃，四极杆温度150℃，电子能量70ev，发射电流34.6ua，质量范围20～800amu。通过agilent5975cmsd化学工作站检索nist标准质谱图库，同时结合有关质谱图文献解析，对混合油中的化学成分进行鉴定。通过agilent5975cmsd化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法计算求出各化学成分的峰面积相对百分含量。中药油和回收油混合物中含15.33wt％萜类化合物，其中33.56wt％单萜、30.29wt％倍半萜；含3.21wt％丁香油酚，含7.56wt％黄酮类化合物，其中芍药苷占33.25wt％。含22.54wt％多酚类化合物，其中白藜芦醇占56.88wt％；实施例2：按如下方法制备纯中药舒筋活络油：一、原料的准备夹带剂为无水乙醇；精油为艾草精油：红花精油：冬青精油按重量比1:3:1配制；石菖蒲、三七、川芎、丁香、丹皮、石见穿、莪术、虎杖、苦艾、赤芍、石香薷、八角茴香、广藿香、穿心莲、麝香均为干品或中药饮片。二、纯中药舒筋活络油的制备(1)按如下重量份称取生药原料：40份石菖蒲、20份三七、50份川芎、35份丁香、50份丹皮、60份石见穿、18份莪术、80份虎杖、35份苦艾、90份赤芍、40份石香薷、20份八角茴香、15份广藿香、45份穿心莲、30份麝香生药原料粉碎后过100目筛，3倍体积80％乙醇水溶液浸泡48h，抽滤，将滤液用滤纸过滤，置于旋转蒸发仪上于35℃进行减压蒸馏，除掉溶液中的乙醇，得提取物水溶液，将提取物水溶液用石油醚反复萃取3次，每次100ml，收集到锥形瓶中，将下层水溶液取出，用乙酸乙酯反复萃取3次，每次100ml，收集到锥形瓶中，将下层水溶液取出，再用正丁醇反复萃取3次，收集到锥形瓶中，将剩余部分同样收集到锥形瓶中；(2)抽滤后将原料粉末投入co2超临界萃取釜中，按照萃取温度60℃，萃取压力30mpa恒压，10wt％夹带剂，co2流速30kg/h，先进行动态萃取，萃取时间为1.2h，再进行静态萃取，萃取时间为0.3h，动态萃取时间：静态萃取时间＝4:1，萃取液过0.22μm滤膜，滤液在分液漏斗中以等体积正己烷萃取，将正己烷萃取物与步骤(1)中石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物混合，于60℃旋转蒸发仪浓缩去除有机萃取剂得中药油；(3)按料水重量比1:60将生药原料萃取后的药渣进行共水蒸馏，蒸馏过程中持续加入蒸馏水以补充馏出液，蒸馏3h，共水蒸馏同时进行超声处理，具体步骤如下：蒸馏开始后15min进行45khz频率的超声处理，以工作5min，停止10min作为一个处理周期，连续处理10个周期。以500ml馏出液为单位进行收集，收集后用等体积无水乙醚萃取1h，然后分液收集乙醚，再加入无水硫酸钠干燥，将萃取用乙醚在水浴50℃下回收溶剂，收得粗提物；(4)使用250目的硅胶装柱制备层析柱，按径高比1:16装柱后，称量粗提物，按重量比1:3将粗提物溶于洗脱液，室温上样，上样量为粗提物与硅胶质量比为1:200，用洗脱液作为流动相洗脱，洗脱液流速为3.8ml/min以30ml为一个单位收集洗脱液，洗脱的同时，用薄层层析点样跟踪分析，根据点样情况收集流份，收集有效流份后，在室温下减压挥发溶剂得回收油；所述洗脱液由乙酸乙酯:石油醚按体积比1:20配制；(5)将回收油：中药油：精油按3:10:5的重量比混合，加入25wt％活性炭脱色7d，10000rpm离心30min，取上清即得纯中药舒筋活络油。将回收油与中药油按比例混合后按照气相色谱法(中国药典2015版二部附录ve)测定成分。色谱柱为hp-5ms型石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)，柱流量1.0ml/min，载气为高纯度氦气(99.999％)，柱前压7.65psi。程序升温:初始温度130℃,以每分钟1.5℃的速率升温至150℃，以每分钟1℃的速率升温至165℃，进样口温度280℃，分流比20:1。离子源为ei源，离子源温度230℃，四极杆温度150℃，电子能量70ev，发射电流34.6ua，质量范围20～800amu。通过agilent5975cmsd化学工作站检索nist标准质谱图库，同时结合有关质谱图文献解析，对混合油中的化学成分进行鉴定。通过agilent5975cmsd化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法计算求出各化学成分的峰面积相对百分含量。中药油和回收油混合物中含24.57wt％萜类化合物，其中45.27wt％为单萜、43.11wt％为倍半萜；含5.34wt％丁香油酚；含11.23wt％黄酮类化合物，其中芍药苷占50.34wt％；含31.25wt％多酚类化合物，其中白藜芦醇占74.53wt％；实施例3：按如下方法制备纯中药舒筋活络油：一、原料的准备夹带剂为无水乙醇；精油为玫瑰精油：薰衣草精油：薄荷油：樟脑精油按重量比1:1:3:2配制；石菖蒲、三七、川芎、丁香、丹皮、石见穿、莪术、虎杖、苦艾、赤芍、石香薷、八角茴香、广藿香、穿心莲、麝香均为干品或中药饮片。二、纯中药舒筋活络油的制备(1)按如下重量份称取生药原料：30份石菖蒲、18份三七、43份川芎、30份丁香、42份丹皮、45份石见穿、14份莪术、65份虎杖、27份苦艾、75份赤芍、30份石香薷、15份八角茴香、13份广藿香、30份穿心莲、20份麝香生药原料粉碎后过90目筛，2倍体积70％乙醇水溶液浸泡36h，抽滤，将滤液用滤纸过滤，置于旋转蒸发仪上于35℃进行减压蒸馏，除掉溶液中的乙醇，得提取物水溶液，将提取物水溶液用石油醚反复萃取3次，每次100ml，收集到锥形瓶中，将下层水溶液取出，用乙酸乙酯反复萃取3次，每次100ml，收集到锥形瓶中，将下层水溶液取出，再用正丁醇反复萃取3次，收集到锥形瓶中，将剩余部分同样收集到锥形瓶中；(2)抽滤后将原料粉末投入co2超临界萃取釜中，按照萃取温度50℃，萃取压力16mpa，8wt％夹带剂，co2流速20kg/h，先进行动态萃取，萃取时间为45min，再进行静态萃取，萃取时间为15min，动态萃取时间：静态萃取时间＝3:1，萃取液过0.22μm滤膜，滤液在分液漏斗中以0.5倍体积正己烷萃取，将正己烷萃取物与步骤(1)中石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物混合，于60℃旋转蒸发仪浓缩去除有机萃取剂得中药油；(3)按料水重量比1:35将生药原料萃取后的药渣进行共水蒸馏，蒸馏过程中持续加入蒸馏水以补充馏出液，蒸馏2h，共水蒸馏同时进行超声处理，具体步骤如下：蒸馏开始后15min进行35khz频率的超声处理，以工作5min，停止10min作为一个处理周期，连续处理6个周期。以275ml馏出液为单位进行收集，收集后用等体积无水乙醚萃取1h，然后分液收集乙醚，再加入无水硫酸钠干燥，将萃取用乙醚在水浴50℃下回收溶剂，收得粗提物；(4)使用200目的硅胶装柱制备层析柱，按径高比1:12装柱后，称量粗提物，按重量比1:3将粗提物溶于洗脱液，室温上样，上样量为粗提物与硅胶质量比为1:125，用洗脱液作为流动相洗脱，洗脱液流速为2.4ml/min以20ml为一个单位收集洗脱液，洗脱的同时，用薄层层析点样跟踪分析，根据点样情况收集流份，收集有效流份后，在室温下减压挥发溶剂得回收油；所述洗脱液由乙酸乙酯:石油醚按体积比1:15配制；(5)将回收油：中药油：精油按2:7.5:5的重量比混合，加入20wt％活性炭脱色4d，10000rpm离心30min，取上清即得纯中药舒筋活络油。将回收油与中药油按比例混合后按照气相色谱法(中国药典2015版二部附录ve)测定成分。色谱柱为hp-5ms型石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)，柱流量1.0ml/min，载气为高纯度氦气(99.999％)，柱前压7.65psi。程序升温:初始温度130℃,以每分钟1.5℃的速率升温至150℃，以每分钟1℃的速率升温至165℃，进样口温度280℃，分流比20:1。离子源为ei源，离子源温度230℃，四极杆温度150℃，电子能量70ev，发射电流34.6ua，质量范围20～800amu。通过agilent5975cmsd化学工作站检索nist标准质谱图库，同时结合有关质谱图文献解析，对混合油中的化学成分进行鉴定。通过agilent5975cmsd化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法计算求出各化学成分的峰面积相对百分含量。中药油和回收油混合物中含20.22wt％萜类化合物，其中39.11wt％为单萜、36.54wt％为倍半萜；含4.28wt％丁香油酚；含9.39wt％黄酮类化合物，其中芍药苷占42.08wt％；含25.89wt％多酚类化合物，其中白藜芦醇占66.34wt％；实施例4：其余均与实施例3相同，不同之处在于共水蒸馏时不进行超声处理。夹带剂为分析纯甲醇。中药油和回收油混合物中含14.43wt％萜类化合物，其中22.17wt％为单萜、25.14wt％为倍半萜；含3.28wt％丁香油酚；含8.26wt％黄酮类化合物，其中芍药苷占43.25wt％；含12.66wt％多酚类化合物，其中白藜芦醇占47.28wt％；对照实施例1：其余均与实施例3相同，不同之处在于仅将中药油与精油按9.5：5的重量比进行复配。中药油中含10.16wt％萜类化合物，其中18.45wt％为单萜、16.29wt％为倍半萜；含1.11wt％丁香油酚；含3.98wt％黄酮类化合物，其中芍药苷占22.19wt％；含13.26wt％多酚类化合物，其中白藜芦醇占33.98wt％；对照实施例2：根据中国专利cn103393854b中公开的方法制备植物精油，作为后续的性能实验中的对照组。气相色谱成分检测结果显示，对照实施例1仅采用二氧化碳超临界萃取，与实施例3相比对多酚类、黄酮类、萜类化合物等主药活性成分含量显著降低，芍药苷、丁香油酚、萜类化合物、白藜芦醇的占比也明显下降，下降幅度大于多酚类、黄酮类、萜类化合物，说明二氧化碳超临界萃取对芍药苷、丁香油酚、萜类化合物、白藜芦醇的萃取率较低，当不进行后续回收油制备时，大量芍药苷等物质存在于药渣中未被回收，而其他物质在超临界萃取的比例较高，药渣中含量较低，因此造成芍药苷、丁香油酚、萜类化合物、白藜芦醇占比下降明显。实施例4未采用超声辅助处理，各物质提取率也显著低于实施例1～3，说明超声处理对目的物质的溶出萃取有明显的帮助，可显著提高多酚类、黄酮类、萜类化合物等活性物质的萃取量。将实施例1～3及对照实施例1～2中制备的活络油或精油进行如下实验：1、二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验受试动物：km小鼠，清洁级，18-20g，雄性。实验方法：将小鼠随机分组，每组10只，即阴性对照组，阳性对照组，实施例1～3组、对照实施例1～2组。阴性对照组小鼠左耳双面均匀涂抹大豆油l0μl/只；阳性对照组(地塞米松)左耳双面均匀涂抹宏利活络油10μl/只，实施例1～3组及对照实施例1～2组分别在小鼠左耳双面均匀涂抹受试药物l0ul/只。实验步骤：(1)按要求剂量在各实验组小鼠左耳两侧均匀涂抹相应药物；(2)给药90min后，用棉球擦去左耳所涂试剂，在左耳双面均匀涂抹二甲苯(50ul/只)致炎；(3)致炎30min后，处死小鼠，剪下双耳，用7mm打孔器在鼠耳相同位置打下耳片，称重，记录。结果见表1：表1活络油抗炎效果实验结果2、活络油镇痛药效实验受试动物：icr小鼠，清洁级，18-20g，雌性实验方法：先在55℃±0.5℃的温度下测试小鼠的初始痛阂值(以小鼠舔涨后足时间作为痛阂值)，选痛阂在5-30s间的小鼠为合格，5-30s内跳跃或痛阈>30s及<5s的小鼠均舍弃不用。将初始痛阈合格的小鼠随机分组，每组10只，即阴性对照组，阳性对照组(宏利活络油)，实施例1～3组、对照实施例1～2组。实验步骤:(1)按照分组，分别给实验组小鼠四只足爪均匀涂抹药物；(2)分别在给药60min,120min时测定各组小鼠的痛阈值(小鼠舔欲后足时间为痛阈值)，痛阂时间超过60s的按60s记；(3)按如下公式计算抑制率：结果见表2：表2活络油小鼠热板镇痛实验结果组别只数痛阈时间(s)抑制率(％)空白对照组1026.3±5.4------阳性对照组1032.1±6.122.05实施例11034.3±5.130.41实施例21033.2±4.926.23实施例31033.9±3.728.89对照实施例11029.9±7.213.68对照实施例21031.8±4.720.913、醋酸扭体镇痛实验实验动物及实验分组同活络油镇痛药效实验，实验步骤如下：(1)用剃毛刀在小鼠腹部剃出约2cmx2cm的皮肤裸露区(不能损坏小鼠皮肤)；(2)按分组给实验小鼠腹部皮肤裸露区均匀涂抹相应药物，连续给药三天；(3)最后一次给药1h后向小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸水溶液0.2ml/只，记录20min内小鼠扭体次数；(4)按如下公式计算抑制率：结果见表3：表3活络油对小鼠醋酸扭体镇痛实验结果组别只数扭体数抑制率(％)空白对照组1021.3±3.3------阳性对照组1011.1±2.347.88实施例11012.3±1.842.25实施例21010.5±2.850.70实施例31013.2±2.238.03对照实施例11016.4±3.023.00对照实施例21015.9±5.325.35由表1～3的结果表明本发明具有优良的镇痛抗炎功效，药效显著好于对照实施例，与阳性抗炎镇痛类药物相当。结合有效活性物质含量，药效与芍药苷、单萜、倍半萜、白藜芦醇等化合物的含量呈正相关，与中药抗炎镇痛理论相符。综上所述，采用多种具有镇痛、活血和抗炎效果的中草药作为原料，其中丁香、苦艾、石香薷、八角茴香、广藿香、穿心莲、麝香富含单萜和倍半萜等挥发性萜类化合物，可促进血液循环，镇痛，达到活血化瘀的作用，川芎、虎杖富含川芎嗪、白藜芦醇等具有抗炎镇痛的化合物，赤芍、丹皮富含芍药苷等抗炎镇痛化合物，三七、石菖蒲、石见穿、莪术作为使药，可显著提高药物的吸收及降低药物毒性，显著提高中药组方的镇痛、活血及疼痛后修复效果。通过二氧化碳超临界萃取，有效提高不同物质的萃取，优化超临界萃取的萃取压力、萃取温度等工艺参数显著提高大部分中药活性物质的萃取率和活性，克服热回流等常规提取方法对复杂中药成分提取率低，活性物质易热失活，易氧化的缺点。有效成分中萜类化合物、芍药苷等黄酮类、白藜芦醇等多酚化合物为含多个羰基和羟基的化合物，二氧化碳超临界提取对上述物质的萃取困难，提取率低，因此辅助多种有机溶剂萃取及硅胶柱纯化可靶向提取分离萃取超临界萃取后药渣中的上述活性物质，弥补超临界萃取对个别有效活性物质提取率低的缺陷，常规热回流提取与超临界萃取相互搭配，总萜类、总黄酮、总多酚提取率和活性显著高于单一方法提取，最大限度的提取药物主要有效成分，提高生药原料的利用率。以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内；本发明未涉及的技术均可通过现有技术加以实现。当前第1页1 2 3