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文献速递

前言

在上上一期我们为大家推送了关于FDA批准MBT Sepsityper试剂盒临床应用的好消息点此回顾，受到了用户的广泛关注，同时也收到了很多问题。经过筛选，我们选取了最受关注的6个问题，结合去年由意大利Policlinico Sant’Orsola-Malpighi临床微生物实验室的Cordovana博士的文章：《Rapid Sepsityper in clinical routine: 2 years' successful experience 临床快速Sepsityper应用：2年成功经验分享》[1]，让我们跟随小布一起来寻找答案吧：

文章内容

将MBT Sepsityper整合到日常工作流程中，进行了两年的全面评估。
●   共测试了6918例血培养阳性样本，同时研究了直接用提取物进行耐药性检测的方法流程。
●   重点研究了一些难鉴定细菌，并针对这些特殊菌种调整了方法提升鉴定率。

1

什么是Sepsityper?

答：Sepsityer是布鲁克公司开发的一款用于血培养阳性样本直接提取鉴定的试剂盒，搭配布鲁克MALDI Biotyper微生物质谱鉴定系统，可在报阳后30min内获得种水平鉴定结果，缩短报告时间。本文中所使用的Rapid-Sepsityper流程是基于布鲁克优化后的试剂盒配方，进而减少工作步骤，缩短报告时间至15-20min的快速流程方案。

2

哪些血培养瓶适用Sepsityper流程？

答：在本文章中使用了 BD BACTECTM FX 血培养系统及其配套：

  • 树脂需氧瓶 Plus Aerobic/F

  • 树脂厌氧瓶 Anaerobic/F

  • 含溶血素厌氧瓶 Lytic/10

  • 儿童树脂瓶 Peds Plus/F

理论上市场上相似原理成分的血培养报阳瓶均可用于Sepsityper流程。值得注意的是：有文献报道含活性炭血瓶的直接鉴定率仅为8%-30%[2]。

3

Sepsityper流程适用于哪些临床微生物？鉴定准确性如何？

答：本测试共覆盖了来自75个菌属的187个菌种共6918个阳性样本，包括需氧革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性细菌、酵母菌以及厌氧菌：

  • 平均鉴定率可达86.3%，对肠杆菌科、金黄色葡萄球菌、肠球菌属和李斯特菌属等的鉴定率可达90%以上。

  • 低鉴定率主要来自酵母菌、脆弱拟杆菌、肺炎链球菌以及除李斯特菌属以外的多种阳性杆菌。

MBT Compass软件中的Sepsityper功能模块，优化的检测范围和算法设定，可进一步提升不同菌种的鉴定准确性。

4

怎样提升Sepsityper的鉴定成功率呢？

答：针对问题3中所提及的某些难鉴定但又是临床关注的菌种，作者也进行了针对性的流程改进，显著提升了这些特殊菌种的鉴定率：

肺炎链球菌（14.7%->71.5%）：相对脆弱的细胞结构导致加入裂解液后难以获得足够的完整细胞。将Sepsityper裂解液使用量从200uL减半至100uL，可获得更多菌体。

脆弱拟杆菌（47.8%->89.7%）：样本在加入裂解液后聚集成团难以分散。在减半裂解液的同时增加无菌水清洗一次的步骤。

酵母菌（37.1%->89.5%）：酵母菌报阳时菌种负载过低导致使用直接涂抹法难以得到准确结果。后续使用甲酸-乙腈提取法（Full Sepsityper），并增加阳性样本取样量由1mL 至 2 mL。

具体方法改进可以根据实际样品菌种特点进行调整。

5

Sepsityper可以做混合菌样品吗？

答：在本篇文章中共测试了240个混合菌样品，在两种混合菌样本中67.1%可以得到鉴定结果，其中31.1%可以准确得到两种菌的鉴定结果；三种混合菌样品有60%可以得到鉴定结果（报告两种或一种菌）。进一步体现了Sepsityper应用流程中，同时进行平板转接分纯的重要性。

MBT Compass鉴定软件中的Sepsityper功能模块，包含自动混合菌鉴定功能，针对性地简化流程提高鉴定率。

6

Sepsityper流程是否可以用于直接药敏，其效果如何？

答：质谱鉴定完成之后，所收集菌落沉淀可继续用于药敏测试，在本文2227个测试样品中，不同菌种与平板转接后MicroScan药敏结果一致性为95.1%；同时基于布鲁克MBT Compass软件的分型模块，约有94.1%的产KPC酶的肺炎克雷伯菌和16.7%的MRSA可以通过一步鉴定获得耐药性信息。这证明了针对某些危急病例，Sepsityper ID+AST 可以作为一种快速报告流程的选择。

小布说：

及时准确地鉴定血流感染病原菌对于优化抗菌药物管理和缓解患者预后至关重要，而依靠Sepsityper标准化的工作流程、广泛的适用范围、快速准确的鉴定结果，能够为血流感染快速诊断提供有力支持。本篇文章详尽的叙述了作者在临床日常工作中应用Sepsityper的相关经验，可以帮助各实验室在此基础上进行流程整合、应用和优化。希望可以借此解答用户的部分疑问。

参考文献：

[1] Cordovana et al., Journal of Medical Microbiology. DOI 10.1099/jmm.0.001268.

[2] 中华检验医学杂志2017年3月第40卷第3期.

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