初步介绍异源双功能，两步，光反应交联

异源双功能，两步，光反应交联：

异源双功能交联剂（heterobifunctional crosslinker）含有不同的反应基团。反应基团的特定组合需要进行两步交联。对于蛋白相互作用研究，交联反应基团最有用的组合是一端的氨基特异性反应基团（自发反应）和另外一端的非特异性的光反应基团（光激活）。这种安排使得纯化的诱饵蛋白通过与伯胺反应而被标记上交联剂。被标记的诱饵蛋白之后加入到含有假定相互作用蛋白的细胞或样品中。一旦相互作用复合物形成，将样品用紫外光照射从而激活光反应基团与邻近的功能基团随机地交联。在这里，交联剂和诱饵蛋白同时加入，因此可以将脱靶交联降至最低。

光反应氨基酸：

光反应活性氨基酸为两步光反应交联方法提供了新的选择。将表达诱饵蛋白（或诱饵和猎物蛋白）的细胞培养于含有L-亮氨酸和L-甲硫氨酸的光反应类似物的培养基中，相互作用复合物中蛋白被合成含有双吖丙啶光反应基团，从而用于随后的交联反应。

标记转移试剂：

标记转移是指用标记的交联剂交联相互作用分子（例如诱饵和猎物蛋白），之后切断诱饵和猎物蛋白之间的连接，标记分子保留连接于猎物分子上。这种方法非常有用，因为其可鉴别与感兴趣的蛋白发生弱相互作用或瞬时相互作用的蛋白。最早的标记转移试剂为APDP 等，含有一个光反应活性的羟苯基叠氮基团，可使用碘–125（125I）进行标记。

新一代的多功能标记转移试剂，在可剪切的间隔臂的猎物靶向且具有光反应活性的一端包含生物素基团。生物素标记可以用于纯化捕获的猎物蛋白或诱饵-猎物复合物，并且可通过Western blotting 进行检测。Sulfo–SBED和Mts–Atf–Biotin 试剂是这种类型交联剂的代表。

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上述产品仅用于科研，不可用于人体试验！

小编：wyf  2020.10.27