中医药治疗肺癌的临床数据挖掘及芪玉三龙汤调节Beclin1、Atg5及LC3B的表达抑制肺癌肿瘤生长

目的挖掘安徽中医药大学第一附属医院肺病学科治疗肺癌的临床用药规律,探究临床有效验方芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长、肿瘤细胞微观形态学改变及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(LC3B)表达的影响。方法1、基于792份住院病历探讨中医药治疗肺癌的处方规律利用数据挖掘技术,对安徽中医药大学第一附属医院肺病学科2013年1月至2018年12月住院治疗的792例肺癌患者病历资料进行回顾性分析。使用复杂网络技术构建核心处方网络图、SPSS22.0软件统计核心中药的用药频数及处方药物的性味归经频数分布并进行系统聚类分析和公因子分析、SPSS Clementine Cliene11.1软件的Aprior模块进行中药的关联规则分析以及中药与肿瘤标志物改善的关联规则分析。2、芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达抑制肺癌肿瘤生长采用Lewis肺癌细胞(LLC)接种于小鼠右前肢构建小鼠肺癌模型,造模成功后随机分为模型组、芪玉三龙汤组、顺铂组及联合组,每组18只。模型组(0.2m L/10g Nacl灌胃qd+第1、3、5d腹腔注射Nacl 0.4ml);芪玉三龙汤组(80.48g·kg~(-1)中药药液灌胃qd+第1、3、5d腹腔注射Nacl 0.4ml);联合组(80.48g·kg~(-1)中药药液灌胃qd+第1、3、5d腹腔注射顺铂溶液(DDP)0.4 m L);化疗组(0.2m L/10g Nacl灌胃qd+第1、3、5d腹腔注射顺铂溶液(DDP)0.4 m L)。治疗21 d后脱颈处死肺癌小鼠,剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率;透视电镜观察肿瘤细胞微观结构的变化。免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中Beclin1、自噬相关基因5(Atg5)、微管相关蛋白1轻链3-I(LC3B-I)及微管相关蛋白1轻链3-II(LC3B-II)蛋白表达,并计算LC3B-II/LC3B-I。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织Beclin1m RNA、Atg5m RNA转录水平。结

果1、基于792份住院病历探讨中医药治疗肺癌的处方规律对中药处方进行分析,居前20位的

核心用药分别为:

白花蛇舌草、半枝莲、茯苓、炙甘草、白术、薏苡仁、浙贝母、苦杏仁、陈皮、黄精、南沙参、百合、桃仁、麦冬、姜半夏、太子参、党参、黄芩、黄芪、葶苈子,

共分为清热解毒药、补虚药、祛痰散结药、健脾渗湿药、理气药及活血药六类,其中补虚药中重点选用补气养阴药。处方药物性味归经频数统计分析得出药性选择以寒(微寒、凉)、温(微温)为主,药味选择以苦(微苦)、甘(淡)为主,主归肺、脾、胃经。核心中药的关联规则分析显示居于前10位的药效关联分别清热解毒药→补虚药、祛痰散结药→补虚药、补虚药→清热解毒药、祛痰散结药→清热解毒药等,居于前10位的药物关联分别为半枝莲→白花蛇舌草、白花蛇舌草→半枝莲、茯苓→白术、白花蛇舌草→薏苡仁等。聚类分析共聚为6类,是益气养阴、补脾益肺、清热解毒及祛痰散结的药物组合。因子分析得到白花蛇舌草-半枝莲-黄精、茯苓-白术-党参-黄芪等6个公因子。肿瘤标志物与核心药物的关联规则显示白花蛇舌草配伍半枝莲与CA153、SCC-Ag关联度最高,配伍黄精、黄芪与CA125、CA199关联度最高。半枝莲配伍南沙参-百合、葶苈子-苦杏仁-薏苡仁、葶苈子与TSGF、NSE、CYFRA21-1关联度最高。浙贝母配伍薏苡仁与CEA关联度最高。2、芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达抑制肺癌肿瘤生长芪玉三龙汤能够抑制移植瘤生长,抑瘤率为31.2%,透视电镜发现芪玉三龙汤组肿瘤细胞出现较多双层膜结构自噬小泡及其内容物;免疫组化结果表明自噬关键基因Beclin1,LC3B主要分布在胞浆中,Western blot实验进一步证实,与模型组比较,芪玉三龙汤能够上调Beclin1,Atg5,LC3B蛋白的表达(P<0.01),并且能促进LC3B-I转化为LC3B-II;Real-time PCR实验结果表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够促进Beclin1m RNA、Atg5m RNA的转录(P<0.01)。

结论1、肺癌临床治疗用药广泛,总以益气养阴、补脾益肺、清热解毒、祛痰散结为治疗大法,辅以行气、活血之品,且临证时要根据个体情况调整扶正与祛邪的力度,以达标本兼治。关联规则显示白花蛇舌草、半枝莲配伍补虚药和其他攻邪药与肿瘤标志物指标的改善有关联性。2、芪玉三龙汤通过诱导肺癌细胞自噬而抑制小鼠移植瘤生长,其分子机制可能与上调自噬关键分子Beclin1、Atg5、LC3B表达,促进LC3B-I转化为LC3B-II有关。...