绝对定量转录组技术原理

绝对定量转录组背景简介

常规转录组测序由于文库PCR扩增偏好性，所有序列并不会被同比例放大，因而造成测序定量结果与样本中转录本的原始丰度不一致，导致差异基因筛选不准确（图1）。这也是造成qPCR验证测序结果不一致的主要原因。推出的绝对定量转录组测序，采用主流UMI标记技术[1,2,3]，通过UMI标记每一条序列，可以消除PCR扩增偏好对定量的干扰，真实反映样本中转录本的表达丰度（图2）。在文库PCR扩增和测序过程中难免会引入错误的碱基，具有相同UMI标记的序列可以基于多序列比对来纠正PCR扩增和测序过程中引入的错误，确保获得转录本的真实序列（见图3）。

图1 PCR扩增产生的duplication显著干扰准确定量

图2 UMI标记技术消除duplication干扰

图3 UMI标记技术纠正序列错误

绝对定量转录组技术优势

真实定量：采用UMI标记技术，每一条序列都被唯一标识，保留序列真重复，去除PCR扩增假重复，真实反映样本中转录本的表达丰度。

真实序列：具有相同UMI标记的序列可以基于多序列比对来纠正PCR扩增和测序过程中引入的错误, 确保获得转录本的真实序列。