选择抗体时的“九个大坑”，你中招了吗？
近咱们技术部门的小姐姐接到好多用户朋友的询问，说“不了解正在研究的蛋白用哪个抗体合适”。也有用户朋友经常询问“说明书中写着可以用于ICC/IF，那我做组织的荧光成像是可以的吧？”其实在选择正确抗体的道路上，存在很多“坑”，只要成功避开，就可以选到适合您实验的抗体。今天就来和大家分享一下“如何选择正确的抗体”。1、蛋白的名称和亚型咱们销售员经常拿到一些“似是而非”的英文名称或简称，查的时候不确定推荐的是否就是用户要检测的靶标。针对这个问题，建议大家参考SwissProt蛋白数据库，每个abcam说明书的 “数据库链接”部分，有针对不同种属的基因和蛋白数据库链接， 其中显示SwissProt的就是该蛋白的数据库链接，点击进去后，在页面的左边有筛选框，可以点击您感兴趣的部分查看。
点击Names&Taxonomy部分，可以看到该靶标的基因名称和蛋白名称，以及替代名称，也就是所谓的“小名”，看下您提供的名称是否可以对应上，如此判断该抗体是否适合。
另外，关于蛋白亚型问题，在这里也可以找到答案，点击Sequences部分，可以看到该蛋白有几个亚型，每个亚型的具体氨基酸序列和分子量大小，如果您正好做WB实验，就可以预估您的实验结果，即可能检测到的条带位置。
不能不说，SwissProt数据库实在太强大了，咱们用户常常问到的亚细胞定位-Subcellular location，翻译后修饰-PTM/Processing部分，具体的修饰位点和修饰基团等，都可以一一查看到。2、抗体的应用范围常见的免疫学实验，在abcam的说明书中，主要包括如下几种应用：WB, IHC-P,IHC-Fr,IHC-FrFl,IHC-Wmt,IHC-FoFr,ICC,ICC/IF,IP,ChIP,ChIP/Chip,ELISA,EM,Flow Cyt等等，相信大家看到这些英文单词也会一头雾水吧，单单一个免疫组化-IHC，就可以细分这么多操作方式，而且在不同的品牌，不同英文单词代表的含义还不尽相同，建议大家在选购前，询问清楚不同品牌对应的定义和质保范围。如在abcam产品说明书中，IHC-P即免疫组化石蜡切片，且实验室内部验证时，是搭配酶标二抗，用DAB显色的方式检测的；IHC-FR即免疫组化冰冻切片，内部验证时，是搭配荧光二抗，用荧光成像的方式检测的；IHC-FoFr是冰冻灌注切片；IHC-FrFI是冰冻切片漂片；ICC/IF或ICC都是特指细胞水平的荧光成像，值得注意的是，这里ICC/IF里的IF，很多人会误认为既包括组织也包括细胞的荧光成像，导致选错抗体，做不出结果。3、抗体能识别的样本种属常见的检测种属，经常如下描述：Reactivity：Human, Mouse, Rat, Sheep, Rabbit, Chicken, Hamster, Cat, Dog, Carp, African green monkey, Opossum, Chinese hamster, Common marmoset, Meriones unguiculatus.有时还会见到如下描述：predicted: Cow, Pig, Mammals。请大家务必注意：在abcam的说明书里，Reactivity后面列到的种属是可以质保的，而predicted列到的种属则是根据该蛋白在不同物种中的同源性比对数值，做出的推测。推测的种属并没有经过实验室验证，是不能质保的，仅供参考。4、抗体的动物来源抗体的动物来源即抗体的宿主物种，常见的有Rabbit，Mouse，Rat，Chicken，Goat，Sheep等，当您选购抗体时，建议尽量选和检测样本种属不同的宿主物种，即您检测mouse，尽量选择非mouse来源的抗体，可以选rabbit来源的抗体。5、制备抗体的免疫原在说明书中的免疫原，即Immunogen 部分，经常如下描述，Synthetic peptide within Human X aa 200-250. The exact sequence is proprietary.或者Recombinant full length protein corresponding to X（这里的X指的是蛋白的名称）.建议您根据您的实验目的，去选择合适的抗体，如果您没有特殊实验要求，那么全长的免疫原序列是不错的选择。5、单克隆抗体和多克隆抗体经常有用户问到，单克隆还是多克隆抗体好？其实在回答这个问题前，我们要先解释下这两者的含义，简单来讲，单克隆抗体只能识别抗原的特定抗原表位，而多克隆抗体可以识别抗原的多个抗原表位，所以，单克隆抗体特异性高而灵敏度相对低一些，多克隆灵敏度高而特异性低一些，在不同实验操作时，可以根据如下表格有侧重选择。单克隆抗体多克隆抗体特异性+++批间差+++灵敏度+++WB+++IHC+++ICC+++FlowCyt+++7、抗体的克隆号克隆号是给单克隆杂交瘤细胞产生的抗体的编号。每个杂交瘤细胞克隆产生单个纯同质型抗体。克隆号相同的抗体代表制备抗体时的免疫原序列是相同的。8、抗体的偶联物常见的偶联物有酶、荧光素、生物素等，常见的酶有辣根过氧化物酶-HRP、碱性磷酸酶-AP等，常见的荧光素有传统荧光素FITC、APC、Pe、Pe-cy3、Pe-cy5等，新型荧光素包括Alexa Fluor® 系列和DyLight® 系列各波长的荧光素，一般做多重免疫染色时，会考虑选择直接标记荧光素的一抗，建议您先核实实验室仪器的荧光显微镜或流式细胞仪的配置，选择匹配仪器的激发波长或通道的荧光抗体，尽量避免光谱重叠。如果您需要寻找双标记和三标记免疫荧光染色实验中的常见组合，我们推荐如下：免疫染色抗体组合双色Alexa Fluor® 488和Alexa Fluor® 647三色Alexa Fluor® 405、Alexa Fluor® 555和Alexa Fluor® 6479、抗体验证这里我们重点说下目前有说服力的基因敲除验证，即KO验证，该方法使用单倍体细胞模型的 CRISPR/Cas9 KO 人类细胞系。敲除模型是真正意义上的阴性对照，是抗体验证的标准品。基因敲除模型通过观察基因功能缺失的表型来了解特定基因的功能，这正是该模型的强大之处。目前，abcam有超过1600种的经过敲除验证的抗体，过去的一年中，还将 200 多种非特异性抗体从abcam的产品目录中移除。当然敲除验证仅是为提高抗体质量标准所采取的众多步骤之一。以上就是在抗体选择道路上常常遇到的问题，希望对大家有所帮助。广州东锐科技有限公司和广州新晋生物科技有限公司作为abcam在华南区的一级授权代理商，为您的科研保驾护航，帮助您更快地达成科研使命。